1、考点加强课6 限制酶的选择与目的基因的检测与鉴定(时间：15分钟满分：50分)1.栾树适合生长于石灰石风化产生的钙基土壤中，抗恶劣环境的能力强，因此常用于矿区废弃地恢复过程中的种植。为了增加栾树的耐旱性，某科研所将耐旱基因导入栾树中，流程图如下。回答下列相关问题。(1)Hind和BamH切割部位是Ti质粒的_。被Hind和BamH酶切后，能产生_种DNA片段；过程为_；、过程的基本原理是_。(2)图中将目的基因导入栾树细胞的方法为_，通过这种方法，使目的基因进入植物细胞，并将其插入到植物细胞中_上，使其遗传特性得以稳定维持和表达。(3)矿区废弃地的土壤条件极其恶劣，因此在恢复矿区的生态环境时，
2、人们采取的措施包括_、多层覆盖、特殊隔离、土壤侵蚀控制、植被恢复工程等，其中，关键在于植被恢复，以及为植被恢复所必需的_的重建。解析(1)分析图示，使用的运载体是Ti质粒，因此限制酶切割的部位是TDNA，以便目的基因连接在Ti质粒的TDNA上。中含有两个BamH切割位点，含有一个Hind切割位点，所以用这两种酶切割后产生4种DNA片段。过程为构建基因表达载体。、过程为植物组织培养，原理是植物细胞的全能性。(2)图中将目的基因导入受体细胞的方法为农杆菌转化法，TDNA将目的基因整合到细胞染色体的DNA上。(3)矿区废弃地由于土壤条件极其恶劣，为加速恢复矿区生态环境，人们采取的措施有人工制造表土、
3、多层覆盖、特殊隔离、土壤侵蚀控制、植被恢复工程等。其中，关键在于植被恢复，以及为植被恢复所必需的土壤微生物群落的重建。答案(1)TDNA4构建基因表达载体植物细胞的全能性(2)农杆菌转化法染色体的DNA(3)人工制造表土土壤微生物群落2.(2016天星教育大联考)如图所示为培育转基因抗虫棉的两种思路。请回答下列问题：(1)图中的目的基因应为_基因，与思路2相比思路1的优点是_。(2)分析题图可知，不宜选择Sma这种限制酶切割含目的基因的DNA分子，理由是_。将目的基因和质粒拼接在一起，所用的一类酶中_酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。(3)
4、图中过程得到的完整的重组质粒，除了图中标出的特殊DNA片段外，还应有_；过程采用较多的方法为_，用到的质粒为_；过程常用的试剂为_。答案(1)抗虫筛选出的目的植株能稳定遗传(2)Sma可能会破坏目的基因EcoliDNA连接(3)标记基因和复制原点(不答复制原点也正确)农杆菌转化法Ti质粒秋水仙素3.(2017河北唐山检测)如图为培育转基因山羊生产人酪蛋白的流程图。请回答下列问题：(1)过程为基因工程中的_，人酪蛋白基因为_，可从基因文库中获取，基因文库包括_。(2)过程指的是胚胎移植过程，一般选取_的胚胎进行胚胎移植，不选用原肠胚时期。(3)过程为加速转基因动物的繁育，可以采用_、_等方法。(
5、4)过程指的是目的基因的表达，包括_两个阶段，在分子水平上检测目的基因是否在转基因山羊体内成功表达的方法是_。答案(1)构建基因表达载体目的基因基因组文库和部分基因文库(2)桑椹胚时期或囊胚时期(3)胚胎分割移植体细胞核移植(或克隆技术)(4)转录与翻译抗原抗体杂交4.(2016江西校级一模)凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。(1)科学家已经测出该酶的氨基酸序列，因此可以通过_方法来获取目的基因，获得目的基因后，常利用_技术在体外将其大量扩增。(2)构建重组DNA分子(如图所示)最好选
6、用_限制酶，理由是_。(3)工业化生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶，现多采用重组毛霉或重组的酵母菌来生产，毛霉或酵母菌作为受体细胞的优势是_。(4)研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是_。解析(1)由于已经测出该酶的氨基酸序列，故可推测出相应的RNA和DNA的序列，因此可以通过化学合成方法来获取目的基因，获得目的基因后，常利用PCR技术在体外将其大量扩增，(2)由图示可知，质粒和外源DNA中共同含有且不会破坏目的基因的限制酶是BamH和Pst，因此构建重组DNA分子最好选用Bam
7、H和Pst限制酶，这样可以防止自身的黏性末端连接，防止目的基因与载体反向连接。(3)毛霉较重组大肠杆菌或芽孢杆菌作为受体细胞的优势是毛霉为真核微生物，含有内质网和高尔基体可对蛋白进行加工和修饰。(4)考查蛋白质工程改造蛋白质结构的步骤。通过分析想要的蛋白质的功能，预测蛋白质应有的结构，然后根据蛋白质的结构逆向推测控制该蛋白质合成的基因的碱基组成及排列顺序。最后就是将改造后的目的基因导入受体细胞，从而转录翻译得出目的蛋白。答案(1)化学合成PCR(2)BamH和Pst提高重组DNA分子的比例(防止自身的黏性末端连接，防止目的基因与载体反向连接)(3)含有内质网和高尔基体可对蛋白进行加工和修饰(4)蛋白质工程
