1、第39讲微生物的培养与应用(时间：15分钟满分：50分) 1.如图所示为分离分解纤维素的微生物的实验流程。回答下列相关问题：梯度稀释(1)图中采集土样时，一般选择_丰富的环境。图中过程所用的培养基以纤维素为唯一_，选择培养的目的是_。(2)图中过程采用的接种方法为_(填“平板划线法”或“稀释涂布平板法”)，所用的培养基中的染料是_，该染料能与纤维素形成_复合物。图中过程挑选菌落的标准是_。(3)常采用_法对实验中所用的培养基进行灭菌。解析(1)纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中，选择培养基应以纤维素为唯一碳源。选择培养的目的是使那些能够适应选择培养基中的营养条件的微生物得到迅速繁殖。(2
2、)将样品用稀释涂布平板法接种到鉴别培养基上。刚果红是一种染料，它可以与纤维素形成红色复合物，挑选菌落时应选那些周围有透明圈的菌落。(3)对培养基常采用的灭菌方法为高压蒸汽灭菌法。答案(1)纤维素碳源使纤维素分解菌得到增殖(2)稀释涂布平板法刚果红红色菌落周围有透明圈(3)高压蒸汽灭菌2.(2016广东佛山质检)我国规定每升饮用水中大肠杆菌不能超过3个。某兴趣小组尝试对某品牌饮用水的大肠杆菌含量进行检测，操作简图如图甲，伊红美蓝培养基配方如图乙。回答下列相关问题：(1)图甲中滤膜的孔径应_(“大于”或“小于”)大肠杆菌。受此启发，对某些不耐高温的试剂可以怎样除菌？_。(2)配制图乙中的基础培养基
3、时，除了水分、无机盐以外，还应加入_(一种营养成分)，以及_。伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现黑色，从功能上划分，该培养基属于_培养基。(3)该小组通过统计_的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目。理论上他们的统计值要比实际_(“偏高”或“偏低”)，理由是_。答案(1)小于用滤膜过滤除菌(2)氮源琼脂鉴别(3)黑色菌落偏低两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到1个菌落3.(2016广东广州考前热身)当水源不洁或供水管道破损等可能导致生活饮用水的污染，因此生活饮用水的微生物安全性日常检测是很重要的，我国生活饮用水水质标准中规定生活饮用水中细菌总数不得大于100个/mL，总大肠杆菌
4、群不得大于3个/L。(1)检验细菌的数量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，再将水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，这种方法称为_。记录细菌数量除了用活菌计数法，还可以直接取水样用_法直接进行计数。(2)培养基中应含有碳源、_和水等物质，若要从水体中分离出纤维素分解菌，则碳源应为_。(3)如分别取0.1 mL已稀释10倍的水样分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为3、2、2、1，则该水样_(符合/不符合)我国生活饮用水标准。(4)纯化大肠杆菌时使用的培养基一般用_法灭菌，_(可/不可)用加入抗生素的方法防止杂菌感染，原因是_。答案(1)稀
5、释涂布平板法显微镜直接计算(血细胞计数板计数法)(2)氮源、多种无机盐纤维素(3)不符合(4)高压蒸汽灭菌不可大肠杆菌也是细菌，如果加入抗生素也会影响大肠杆菌的生长4.(2016广东江门调研)幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化道溃疡的主要致病因素，在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：请回答：(1)在生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生物的培养基，称做_。(2)配制培养基时，要加入尿素和_指示剂，这是因为Hp含有_，它能以尿素作为_源；若有Hp，则菌落周围会出现_色环带。(3)步骤X表示_。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将
6、菌液_到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得_菌落。(4)临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的_分解为NH3和14CO2。解析(1)选择培养基是指在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。使用选择培养基可以富集筛选目的微生物。(2)由于细菌中合成脲酶，脲酶将尿素分解成氨，会使培养基碱性增强，pH升高，指示剂变红。(3)步骤X表示接种。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得单个菌落。(4)用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的尿素分
7、解为NH3和14CO2。答案(1)选择培养基(2)酚红脲酶氮红(3)接种涂布单个(4)尿素5.在微生物应用中针对所需的特定微生物的选择培养可根据所需分离的微生物的特点，从物理、化学、生物及综合多个方面进行选择，如温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面。如下图描述了采用选择方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。(1)本实验所需培养基为_，碳源为_。(2)实验原理是_。(3)重复培养的目的是_。(4)的菌落中大部分是降解_的微生物。(5)为_组，为_组，设置的目的是_。(6)采用_法，接种到的培养基中，在操作过程中为防止污染应注意的事项是_。答案(1)选择培养基对羟基苯甲酸 (2)利用以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基，经选择培养，选择出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物 (3)增大分解对羟基苯甲酸微生物的浓度 (4)对羟基苯甲酸 (5)对照实验说明通过选择培养的确得到了欲分离的目标微生物 (6)单菌落挑取接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接种环在火焰旁冷却，同时打开皿盖挑取菌落接种到试管中，并塞好棉塞，接种环在火焰上灼烧，杀死残留生物
