1、12 基因工程的基本操作程序12.1 目的基因的获取和基因表达载体的构建学习目标 1.说出基因工程的基本操作程序。 2.理解获取目的基因的途径。3.说出基因表达载体的构建的目的与组成。方式一 抑制疾病传播的转基因蚊子巴西等拉美国家深受致倦库蚊的危害。致倦库蚊可携带多种病毒和寄生虫，能够传播脑炎、丝虫等传染病，而这些传染病常年在拉美国家肆虐。为了抑制疾病的传播，巴西科学家培育出了一种转基因雄性致倦库蚊。科学家在雄性致倦库蚊体内植入一种特殊基因，当具该基因的转基因雄蚊与野生雌蚊交配时，这种基因可以进入雌蚊的基因组，并使雌蚊死亡，从而减少了该种蚊子的数量，达到抑制疾病传播的目的。怎样才能最终得到转基
2、因雄蚊呢？让我们一起来学习基因工程的基本操作程序吧！方式二 师：出示我国有知识产权的转基因抗虫棉的培育图解：问：转基因抗虫棉的培育需要哪些步骤？学生看图并回答：首先要获得目的基因，其次将目的基因连接到 Ti 质粒上，然后将重组的Ti 质粒导入受体细胞，最后要重建转基因植物。根据学生回答补充：还需检测抗虫基因是否已经进入棉花植株，并由此引出基因工程的四部曲。一、目的基因的获取1基因工程的基本操作程序(1)目的基因的获取。(2)基因表达载体的构建。(3)将目的基因导入受体细胞。(4)目的基因的检测与鉴定。2目的基因的获取(1)目的基因：主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有 调控作用的因子。(
3、2)常见方法从基因文库中获取a基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段，导入 受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。b种类Error!c提取依据：基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA，以及基因的表达产物蛋白质等特性。利用 PCR 技术扩增目的基因aPCR 的含义：是一项在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸合成技术。b目的：短时间内大量扩增目的基因。c原理：DNA 双链复制。d前提：有一段已知目的基因的核苷酸序列。e过程第一步：加热至 9095 ，DNA 解链为单链；第二步：冷却至 5560 ，引物结合到互补
4、 DNA 链；第三步：加热至 7075 ，热稳定 DNA 聚合酶(Taq 酶)从引物起始进行互补链的合成。如此重复循环多次。f结果：每一次循环后，目的基因的量可以增加一倍，即成指数形式扩增( 约为 2n，n 为扩增循环的次数)。化学方法直接人工合成a条件：基因比较小，核苷酸序列又已知。b方法：借助 DNA 合成仪用化学方法直接人工合成。归纳总结1.PCR 技术与细胞内 DNA 复制的比较比较项目 细胞内 DNA 复制 PCR 技术解旋方式 解旋酶催化 DNA 在高温下变性解旋场所 主要在细胞核内 细胞外酶 解旋酶、DNA 聚合酶 热稳定 DNA 聚合酶区别温度 细胞内温和条件控制温度，需在不同
5、温度下进行结果 合成整个 DNA 分子 扩增特定的 DNA 片段或基因联系(1)模板：均需要脱氧核苷酸双链作为模板(2)原料：均为四种脱氧核苷酸(3)酶：均需 DNA 聚合酶(4)引物：都需要引物，使 DNA 聚合酶从引物开始进行互补链的合成2.获取目的基因的方法比较从基因文库获取方法 基因组文库部分基因文库(如 cDNA 文库)PCR 技术扩增化学方法直接人工合成过程供体细胞中的DNA限制酶许多 DNA 片段连接表达载体导入受体菌群外源 DNA 扩增，产生特定性状分离目的基因目的基因的 mRNA反转录单链 DNA合成双链 DNA插入载体导入受体菌群(cDNA 文库)分离目的基因目的基因 DN
6、A高温解链单链 DNA与引物结合、DNA 聚合酶大量目的基因蛋白质的氨基酸序列推测mRNA 的核苷酸序列推测基因的核苷酸序列化学合成目的基因优点操作简单 专一性强可在短时间内大量扩增目的基因专一性强，可产生自然界中不存在的新基因缺点工作量大、盲目性大、专一性差操作过程较繁琐，技术要求高需要严格控制温度，技术要求高适用范围小3.获取目的基因的方法选择(1)如果不知道目的基因的核苷酸序列，可以通过构建基因文库的方法，即通过受体菌储存并扩增目的基因后，从基因文库中获取目的基因。(2)如果知道目的基因的核苷酸序列，而且基因比较小，可以通过 DNA 合成仪利用化学方法直接人工合成。(3)如果知道要扩增的
7、目的基因及两端的核苷酸序列，而且基因又比较大，可以通过 PCR技术扩增目的基因。例 1 以下为形成 cDNA(图中的单链 DNA)过程和 PCR 扩增过程示意图。据图分析，下列说法正确的是( )A催化过程的酶是 RNA 聚合酶B过程发生的变化是引物与单链 DNA 结合C催化过程的酶都是 DNA 聚合酶，都能耐高温D如果 RNA 单链中 A 与 U 之和占该链碱基含量的 40%，则一个双链 DNA 中，A 与 U之和也占该 DNA 碱基含量的 40%答案 B解析 由题意可知，分别表示反转录、DNA 的复制、DNA 解链、引物结合到互补 DNA 链及互补链的合成，B 正确；过程由反转录酶催化完成，
8、A 错误；催化过程的酶都是 DNA 聚合酶，过程是在 7075 的高温条件下进行的，只有该过程中的酶需耐高温，C 错误；在 DNA 分子中有碱基 T 无 U，D 错误。例 2 (2017湖南长沙一中期末考试) 下列有关获取目的基因的方法，叙述错误的是( )A.从基因文库中直接获取目的基因的优点是操作简便，缺点是工作量大，具有一定的盲目性B.由于真核细胞的基因中含有不表达的 DNA 片段，所以一般使用人工合成的方法获取真核细胞中的目的基因C.如果基因比较小，核苷酸序列又已知，可以利用化学方法直接人工合成D.PCR 技术的原理是 DNA 复制，需 DNA 连接酶催化 DNA 合成答案 D解析 PC
9、R 技术的原理是 DNA 分子的复制，需要耐高温的 DNA 聚合酶催化 DNA 合成，D 错误。二、基因表达载体的构建1基因表达载体构建的目的使 目 的 基 因 在 受 体 细 胞 中 稳 定 存 在 ， 并 且 可 以 遗 传 给 下 一 代 ， 使 目 的 基 因 能 够 表 达 和 发 挥 作 用 。2基因表达载体的组成3基因表达载体的构建过程一般用同一种限制酶分别切割载体和目的基因，再用 DNA 连接酶把两者连接(如图)。归纳总结1启动子和起始密码子、终止子和终止密码子的区别启动子 终止子 起始密码子 终止密码子化学成分 DNA 片段 DNA 片段mRNA 上三个相邻碱基mRNA 上三
10、个相邻碱基位置 目的基因首端 目的基因尾端 mRNA 首端 mRNA 尾端作用RNA 聚合酶识别和结合的部分，驱决定转录的结束 翻译的起始信号决定翻译过程的结束动基因转录出mRNA2.构建基因表达载体时限制酶的选择原因分析(1)选用同一种限制酶切割目的基因和载体的原因：选用同一种限制酶切割会产生相同的黏性末端，可以在 DNA 连接酶的作用下将切割的目的基因和载体连接起来。(2)基因工程操作时往往用两种限制酶分别切割目的基因的两端以及载体的原因：如果用一种限制酶切割，目的基因两侧的末端以及质粒切口的两个末端都是互补的，因此连接时可能会出现载体与载体、目的基因与目的基因、目的基因与载体三种连接情况
11、，而符合要求的只有载体与目的基因的连接。如果用两种不同的限制酶进行切割就可以有效避免载体与载体以及目的基因与目的基因的连接，提高连接的有效性。例 3 (2017河南南阳一中月考) 在基因工程的操作过程中，获得重组质粒不需要( )DNA 连接酶 限制性核酸内切酶 RNA 聚合酶 具有标记基因的质粒 目的基因 四种脱氧核苷酸A B C D答案 A解析 构建重组质粒时，首先要用限制性核酸内切酶切割含有目的基因的 DNA 片段和载体，其次需要用 DNA 连接酶将目的基因与载体连接；RNA 聚合酶催化转录过程，获得重组质粒时不需要 RNA 聚合酶；获得重组质粒时，需要具有标记基因的质粒作为载体；重组质粒
12、是由目的基因与质粒形成的；四种脱氧核苷酸是合成 DNA 的原料，获得重组质粒不需要四种脱氧核苷酸。例 4 如图是利用基因工程技术培育转基因植物生产可食用疫苗的部分过程示意图，其中Pst、Sma、EcoR 、Apa为四种限制性核酸内切酶。下列说法错误的是( )A图示过程是基因工程的核心步骤B表达载体构建时需要用到限制酶 SmaC抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来D除图示组成外，表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构答案 B解析 图示过程为基因表达载体的构建过程，是基因工程中的核心步骤；构建过程中需要将目的基因完整切割下来，此时要用到限制酶 Pst、EcoR；抗卡那霉素基因是
13、标记基因，目的是便于鉴定和筛选含有目的基因的细胞；基因表达载体包括启动子、目的基因、终止子和标记基因等。1基因工程的核心是( )A目的基因的获取B基因表达载体的构建C将目的基因导入受体细胞D目的基因的检测与鉴定答案 B解析 目的基因构建表达载体后才能使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能发挥作用，只有构建表达载体后，才能根据载体上的标记基因鉴别目的基因是否导入了受体细胞，从而筛选出含目的基因的受体细胞，避免进行盲目的无效工作。2如图表示基因工程中获取水稻某目的基因的不同方法。下列相关叙述中正确的是( )A三种方法都需要酶并均在体外进行B碱基对的排列顺序均相同C
14、三种方法均属于人工合成法D方法 a 不遵循中心法则答案 A解析 这三种方法都是在体外进行的，且都用到酶(方法 a 需要反转录酶和 DNA 聚合酶；方法 b 需要限制酶；方法 c 需要 DNA 聚合酶)，A 正确；通过方法 a 得到的目的基因不含有内含子，通过方法 c 得到的目的基因的碱基序列可能有多种，因此碱基对的排列顺序不都相同，B 错误；方法 a 和 c 属于人工合成法，而方法 b 是从供体细胞的 DNA 中直接分离目的基因的方法，C 错误；方法 a 遵循中心法则，D 错误。3如图为基因表达载体的模式图，若结构 X 是表达载体所必需的，则 X 最可能是 ( )A氨苄青霉素抗性基因 B启动子
15、C限制酶 DDNA 连接酶答案 B解析 启动子是该表达载体所必需的，功能是启动插入基因的转录过程。4下列有关抗虫基因表达载体的叙述，正确的是( )A切割含抗虫基因的 DNA 片段和载体必须用同一种限制酶B抗虫基因表达载体中要有启动子和终止密码子C抗虫基因表达载体必须具备标记基因，其作用是筛选含有目的基因的受体细胞D抗虫基因的表达启动于复制原点答案 C解析 切割含抗虫基因的 DNA 片段和载体可以用不同的限制酶，只要切割出的末端相同即可，A 项错误；抗虫基因表达载体的构建必须具备启动子和终止子，终止密码子位于mRNA 上，B 项错误；基因表达载体必须具备标记基因，其作用是检测目的基因是否导入到受
16、体细胞中，从而将含有目的基因的受体细胞筛选出来，C 项正确；抗虫基因的表达开始于启动子，D 项错误。5重叠延伸 PCR 技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次 PCR 扩增，从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的 DNA、不同来源的 DNA 片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景。如图是利用重叠延伸PCR 技术扩增某目的基因的过程。其主要设计思路是用具有互补配对片段的引物( 图中引物2、引物 3)分别进行 PCR，获得有重叠链的两种 DNA 片段，再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得目的基因。结合所学知识，回答下列问题：(1)引物中 G C
17、的含量影响着引物与模板 DNA 结合的稳定性，引物中 GC 的含量越高，结合稳定性_。(2)在第一阶段获得两种具有重叠片段 DNA 的过程中，必须将引物 1、2 和引物 3、4 置于不同反应系统中，这是因为_。(3)在引物 1、引物 2 组成的反应系统中，经第一阶段形成图示双链 DNA 至少要经过_次复制。(4)若在引物 1、引物 2 组成的反应系统和引物 3、引物 4 组成的反应系统中均复制一次，共产生_种双链 DNA 分子。(5)若利用微生物扩增该目的基因，其基本步骤包括：_ 、_、微生物的筛选和培养、从菌群中获取目的基因。答案 (1)越高 (2) 引物 2 和 3 中存在互补配对片段，置
18、于同一反应系统时它们会发生结合而失去作用 (3)2 (4)3 (5)目的基因与载体结合 将重组 DNA 导入受体细胞解析 (1)由于 C 与 G 之间有 3 个氢键，而 A 与 T 之间有 2 个氢键，所以引物中 C 与 G 含量越高，引物与模板 DNA 的结合就越稳定。(2)由题干可知，引物 2 和引物 3 具有互补配对片段，如果将引物 2 和引物 3 放在一个反应系统中，则会引起引物 2 和引物 3 的结合而失效。(3)第一阶段形成的 2 个 DNA 分子分别含有引物 1 和引物 2，图中第一阶段形成的 DNA 分子同时具有引物 1 和引物 2，图示双链 DNA 分子至少要经过 2 次复制
19、才能形成。(4)两个反应系统中各自形成 2 种 DNA 分子，但由于引物 1 和引物 4 形成两个与原 DNA 相同的 DNA 分子，所以含有引物 1 和 4 的 DNA 属于同一种 DNA，故共形成 3 种 DNA 分子。(5)利用微生物扩增该目的基因的基本步骤为：将目的基因与载体结合； 将目的基因导入受体细胞；微生物的筛选和培养，从菌群中获取目的基因。对点训练题组一 目的基因的获取1基因工程的基本操作程序有：使目的基因与载体相结合；将目的基因导入受体细胞；检测目的基因的表达是否符合特定性状要求；目的基因的获取。正确的操作顺序是( )A BC D答案 C解析 基因工程的主要操作步骤顺序是：目
20、的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测和鉴定。2下列获取目的基因的方法中需要模板链的是( )从基因文库中获取目的基因 利用 PCR 技术扩增目的基因 反转录法 通过DNA 合成仪利用化学方法人工合成A BC D答案 D解析 PCR 利用的是 DNA 双链复制原理，即将双链 DNA 之间的氢键打开，变成单链DNA ，作为聚合反应的模板。反转录法则是以目的基因转录成的 mRNA 为模板，在反转录酶的作用下，先反转录形成互补的单链 DNA，再合成双链 DNA。、均不需要模板。3(2017郑州一中高二下学期期中) 下列关于基因文库的说法，错误的是( )A可分为基因组文库和部
21、分基因文库BcDNA 文库属于部分基因文库C基因组文库的基因在不同物种之间均可进行基因交流D同种生物的 cDNA 文库中基因数量较基因组文库少答案 C解析 基因组文库中只有部分基因能够在不同物种之间进行基因交流。4下图表示基因工程中目的基因的获取示意图，不正确的是( )A表示 PCR 技术，用来扩增目的基因B从基因文库中要得到所需的目的基因可以根据目的基因的相关信息来获取C若获取的目的基因相同，则图中基因组文库小于 cDNA 文库D若基因比较小，核苷酸序列又已知，则可以直接通过人工合成的方法获取答案 C解析 可以利用 PCR 技术，大量扩增目的基因， A 项正确；可以根据目的基因的相关信息，如
22、核苷酸序列、基因功能、基因在染色体上的位置等，从基因文库中得到所需的目的基因，B 项正确；基因组文库是从 DNA 中获取的，而 cDNA 文库是利用 mRNA 反转录法获得的，不包含内含子，故基因组文库大于 cDNA 文库，C 项错误；若基因比较小，核苷酸序列又已知，则可以直接通过 DNA 合成仪用化学方法直接人工合成，D 项正确。题组二 基因表达载体的构建5下列哪项不是表达载体所必需的组成成分( )A目的基因 B启动子C终止子 D抗青霉素基因答案 D解析 A、B、C 三项均为表达载体的必要的组成成分；具有标记基因也是表达载体所必需的组成成分，但抗青霉素基因只是标记基因中的一种，不是所有的表达
23、载体都含有。6(2017无锡模拟)环境雌激素 (EEs)会影响动物和人类的性腺发育。斑马鱼在 EEs 的诱导下，会表达出卵黄蛋白原(vtg)。已知绿色荧光蛋白(GFP)基因能使斑马鱼发光，欲获得能检测水中是否含有 EEs 的转基因斑马鱼，下列操作合理的是( )A将 EEs 基因的启动子与 GFP 基因重组B将 vtg 基因的启动子与 GFP 基因重组C将 GFP 基因的启动子与 GFP 基因重组D将 GFP 基因的启动子与 vtg 基因重组答案 B解析 由题意可知，环境中的 EEs 可诱导斑马鱼体内 vtg 基因的表达，在不含 EEs 的环境中，斑马鱼体内 vtg 基因不能表达。因此，只要将
24、vtg 基因的启动子与 GFP 基因重组并导入斑马鱼体内，便能根据斑马鱼是否发光检测水中是否含 EEs。7下图为基因表达载体的模式图，下列有关基因工程中载体的说法，错误的是( )A基因表达载体的构建是在生物体外完成的B任何基因表达载体的构建都是一样的，没有差别C图中启动子位于基因的首端，是 RNA 聚合酶识别和结合的部位D抗生素抗性基因的作用是作为标记基因，用于鉴别受体细胞中是否导入了目的基因答案 B解析 由于受体细胞有植物、动物和微生物之分，以及目的基因导入受体细胞的方式不同，所以基因表达载体的构建也会有所差别，不可能千篇一律。8在基因表达载体的构建中，下列说法不正确的是( )一个基因表达载
25、体的组成只包括目的基因、启动子、终止子 有了启动子才能驱动基因转录出 mRNA 终止子的作用是使转录在所需要的地方停止 所有基因表达载体的构建是完全相同的A BC D答案 B解析 基因表达载体的结构包括目的基因、标记基因、启动子、终止子，错误；有了启动子才能驱动基因转录出 mRNA，正确；终止子的作用是使转录在所需要的地方停止，正确；由于受体细胞有植物、动物以及微生物之分，以及目的基因导入受体细胞的方法不同，因此基因表达载体的构建是不完全相同的，错误。综合强化9 “X 基因”是 DNA 分子上一个有遗传效应的片段，若要用 PCR 技术特异性地拷贝“X基因” ，需在 PCR 反应中加入两种引物
26、(注：引物的作用是与模板链形成双链后在 DNA 聚合酶的作用下就可以继续链的延伸)，两种引物及其与模板链的结合位置如下图甲所示。经 4 轮循环后产物中有五种不同的 DNA 分子，如下图乙所示，其中第种 DNA 分子有几个( )A8 B6 C4 D2答案 A解析 由图分析可知：X 基因第一次复制得到两个两种 DNA 分子：和；X 基因第二次复制得到四个四种 DNA 分子：复制得和、复制得和；X 基因第三次复制得到八个五种 DNA 分子：复制得和、复制得和、复制得和、复制得和；X 基因第四次复制得到 16 个五种 DNA 分子：复制得和、两个复制得两个和两个、两个复制得两个和两个、两个得到 4 个
27、。从上面的推测可知，第四轮循环产物中有 8 个。10下列对基因表达载体构建的叙述，不正确的是( )A需要限制酶和 DNA 连接酶等特殊工具B基因表达载体中有的含有启动子和密码子C标记基因不一定是抗生素抗性基因D基因表达载体的构建是基因工程的核心答案 B解析 基因表达载体是目的基因与载体的结合，在此过程中需用同一种限制酶切割目的基因与载体，用 DNA 连接酶将相同的末端连接起来，A 项正确；基因表达载体含有启动子、终止子、标记基因和目的基因，密码子位于 mRNA 上，B 项错误；抗生素抗性基因可作为标记基因，但标记基因不都是抗生素抗性基因，C 项正确；基因表达载体的构建是基因工程的核心，在细胞外
28、进行，使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用，D 项正确。11为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种。下图是获取植酸酶基因的流程。据图回答下列问题：(1)B 过程需要的酶是_ 。(2)图中基因组文库_( 填“小于” “大于”或“等于”)cDNA 文库。(3)目的基因和除可从构建的文库中分离外，还可以分别以图中 _和_为模板直接进行 PCR 扩增，该过程中所用酶的显著特点是_。答案 (1)反转录酶 (2) 大于 (3)DNA cDNA耐高温解析 B 过程是以 RNA 为模板合成 DNA 的反转录过程，需要的酶是反转录酶；目的
29、基因和除可从构建的文库中分离外，还可以分别以图中 DNA 和 cDNA 为模板直接进行PCR 扩增，该过程中所用酶的显著特点是耐高温。12(2017吉林舒兰一高高二下月考) 识图作答：(1)PCR 技术的中文名称为_，加热使 DNA 双链打开，这一步是打开氢键，在细胞中是在_酶的作用下进行的。(2)当温度降低时，引物与模板末端结合，在_酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成 2 个 DNA 分子，此过程中的原料是_，遵循的原则是_。(3)PCR 技术的前提是_。 “PCR”技术使 DNA 分子大量复制，若将一个用 15N 标记的 DNA 分子放入试管中，以 14N 标记的脱氧核苷酸为原料，连续复
30、制 4 次之后，则 15N 标记的 DNA 分子占全部 DNA 分子的比例为_。在基因工程中，把选出的目的基因(共 2 000 个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是 860 个)放入 DNA 扩增仪中扩增 4 代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是_，其中在第四代利用的胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是_。答案 (1)多聚酶链式反应 解旋(2)Taq 4 种脱氧核苷酸 碱基互补配对原则(3)要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物 17 100 9 12018解析 (1)PCR 是多聚酶链式反应的缩写。加热使 DNA 双链打开，这一步是打开氢键，在细胞中是在解旋酶的作用下
31、进行的。(2)当温度降低时，引物与模板末端结合，在 Taq 酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成2 个 DNA 分子，此过程中的原料是 4 种脱氧核苷酸，遵循的原则是碱基互补配对原则。(3)利用 PCR 技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。PCR 技术使 DNA 分子大量复制，若将一个用 15N 标记的 DNA 分子放入试管中，以 14N 标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制 4 次之后，总 DNA 数达到 2416个，其中含 15N 的 DNA 是 2 个，所以 15N 标记的 DNA 分子占全部 DNA 分子的比例为 。根据题意可知：A T860
32、，总碱基数是 4 000，所以 GC 1 140，那么扩增 4216 18代，需要提供的胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是 1 140(241)17 100 个。其中在第四代共产生 8 个 DNA，所以在该过程中利用的胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是 1 14089 120 个。13(2016全国丙，40)图(a)中的三个 DNA 片段上依次表示出了 EcoR、BamH和Sau3A三种限制性核酸内切酶的识别序列与切割位点，图(b) 为某种表达载体的示意图(载体上的 EcoR 、Sau3A的切点是唯一的)。根据基因工程的有关知识，回答下列问题：(1)经 BamH酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被_酶切后的产
33、物连接，理由是_。(2)若某人利用图(b) 所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图(c)所示，这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有_，不能表达的原因是_。(3)DNA 连接酶是将两个 DNA 片段连接起来的酶，常见的有_和_，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是_。答案 (1)Sau3A 两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端 (2)甲、丙 甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游，二者的目的基因均不能被转录 (3)E coliDNA 连接酶 T 4DNA 连接酶 T 4DNA 连接酶解析 (1)由于限制性核酸内切酶 Sau3A与 BamH切割后形成的黏性末端相同，所以经BamH酶切得到的目的基因可以与上述表达载体被 Sau3A酶切后的产物连接。(2)在基因表达载体中，启动子应位于目的基因的首端，终止子应位于目的基因的尾端，这样目的基因才能表达。图中甲、丙均不符合，所以不能表达目的基因的产物。(3)常见的 DNA 连接酶有 EcoliDNA 连接酶和 T4DNA 连接酶，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是T4DNA 连接酶。