1、第8课时 固定化酶的制备和应用,第三章 酶的应用技术实践,学习导航 1.简述固定化酶的制作方法。 2.简述固定化细胞技术的应用及酵母菌细胞的固定化技术。 重难点击 1.简述固定化酶的制作方法。 2.简述酵母菌细胞的固定化技术。,一、固定化酶和制备固定化酶的常用方法,二、固定化细胞技术的应用,内容索引,当堂检测,一、固定化酶和制备固定化酶的常用方法,1.固定化酶 (1)概念：固定化酶是指用 或 的方法将酶与 结合在一起形成的仍具有酶活性的 。 (2)特点：在催化反应中，它以 状态作用于底物，反应完成后容易与水溶性 和 分离，可被 使用。,基础梳理,物理学,化学,固相载体,酶复合物,固相,反应物,
2、产物,反复,2.制备固定化酶的常用方法 (1)物理吸附法是将酶吸附在 、 等多糖类或多孔玻璃、离子交换树脂等载体上的固定方式，其显著特点是工艺简便且条件温和。 (2)化学结合法是利用 进行酶与载体之间的交联，在酶和多功能试剂之间形成 ，从而得到三维的 。 (3)包埋法是将酶包埋在能固化的 中，如将酶包裹在_ 等高分子凝胶中包埋成 ，或包裹在 等半透性高分子膜中包埋成 。,纤维素,琼脂糖,多功能试剂,共价键,交联网架结构,载体,聚丙烯酰胺凝胶,格子型,硝酸纤维素,微胶囊型,问题探究,由于酶的分离与提纯有许多技术性难题，造成酶制剂来源有限、成本高、不利于大规模地使用。人们针对酶不能被广泛应用这一情
3、况，一直在寻求改善方法，其中之一就是固定化酶技术的应用。观察下图有关制备固定化酶的常用方法，结合教材回答下列问题：,(1)图A为 ，它的显著特点是 且条件 ，在生产实践中应用广泛。 (2)图B为 ，它是利用多功能试剂进行酶与载体之间的交联，在酶和多功能试剂之间形成 ，从而得到三维的交联网架结构。,物理吸附法,工艺简便,温和,化学结合法,共价键,(3)包埋法是将酶包埋在 中。将酶包裹在聚丙烯酰胺凝胶等 中(如图C)，包埋成 型；或包裹在 等半透性高分子膜中(如图D)，包埋成 型。,能固化的载体,高分子凝胶,格子,硝酸纤维素,微胶囊,各种固定化酶方法的比较,拓展应用,1.如图是酶的几种固定方式示意
4、图，其所采用的固定方法依次是A.物理吸附法、化学结合法、包埋法 B.化学结合法、物理吸附法、包埋法 C.包埋法、物理吸附法、化学结合法 D.包埋法、化学结合法、物理吸附法,答案,解析,解析 图表示酶包埋在细微网格里，应属于包埋法； 图表示许多酶分子通过特殊载体连接起来，成交联网架结构，应属于化学结合法； 图表示将酶固定在一定的支持物上，属于物理吸附法。,解析 固定化酶是将酶固定在不溶于水的载体上，使酶既能与底物接触，又能与产物分离；同时，固定在载体上的酶还可以被反复利用，降低成本，产物中也不含酶，提高了产品的纯度。固定化酶虽可以多次利用，但不可长久使用。,2.下列关于固定化酶和一般酶制剂在应用
5、效果上的说法，错误的是 A.固定化酶可长久使用 B.一般酶制剂应用后和产物混在一起，产物的纯度不高 C.一般酶制剂参加反应后不能重复利用 D.固定化酶可以反复利用，降低生产成本，提高产量和质量,答案,解析,二、固定化细胞技术的应用,基础梳理,1.固定化细胞的概念 通过各种方法将细胞与一定的 结合，使细胞仍保持原有的生物活性，这一过程称为细胞固定化。固定化细胞仍能进行正常的生长、繁殖和代谢，可以像游离的细胞一样用于发酵生产。 2.应用：固定化细胞可以取代游离的细胞进行发酵，生产各种物质。 (1)在工业生产上，利用 可以生产多种色素、香精、药物、酶等。 (2)利用 可以生产酒精、啤酒、谷氨酸、淀粉
6、酶、蛋白酶、果胶酶、纤维素酶、青霉素、头孢霉素等。,载体,固定化植物细胞,固定化微生物细胞,(3)在医学上，利用 可以生产小儿麻痹症疫苗、狂犬病疫苗、麻疹疫苗、肝炎疫苗、口蹄疫疫苗等，还可以生产生长激素、干扰素、胰岛素、催乳素、促性腺激素等。 (4)将固定化的 制成微囊，能治疗糖尿病。 (5)用固定化细胞制成的生物传感器可用于医疗诊断。 (6)在化学分析方面，可制成各种 传感器，用来测定醋酸、乙醇和氨等。 (7)固定化细胞在 、能源开发等领域都有着重要的应用。,固定化动物细胞,胰岛细胞,固定化细胞,环境保护,3.固定化细胞技术的优点 (1)固定化细胞技术无须进行酶的 ，减少了酶的 损失，同时大
7、大降低了生产成本。 (2)固定化细胞不仅可以作为 发挥作用，而且可以利用细胞中所含的 完成一系列的催化反应。 (3)对于活细胞来说，保持了酶的原始状态，酶的 更高。 (4)细胞生长停滞时间 ，反应 。 正是由于固定化细胞的这些无可比拟的优势，尽管固定化细胞技术的出现远远晚于固定化酶技术，但它的应用范围比固定化酶更广泛。,分离和纯化,活力,单一的酶,复合酶系,稳定性,短,快,4.固定化细胞技术的缺点 (1)固定化细胞只能用于生产 酶和其他能够分泌到细胞外的产物。 (2)由于载体的影响，营养物质和产物的 受到一定限制。 (3)在好氧性发酵中， 的传递和输送成为关键的限制因素。 5.细胞的固定化方法
8、是应用最广泛的细胞固定化方法，适用于各种微生物、_ 和 细胞的固定化。凝胶包埋法所使用的载体主要有 、琼脂、角叉菜胶、明胶等。用海藻酸钠凝胶包埋法制备固定化细胞的操作 ，条件 ，对细胞 。,细胞外,扩散,溶解氧,凝胶包埋法,动物,植物,海藻酸钠凝胶,简便,温和,无毒性,6.酵母菌细胞的固定化技术的过程 准备各种实验药品和器材制备 酵母菌细胞配制物质的量浓度为0.05 mol/L的氯化钙溶液制备 浸泡和洗涤 麦芽汁。,麦芽汁,活化,固定化细胞,发酵,问题探究,分析下列酵母菌细胞固定化操作流程，回答问题。,准备各种实验药品和器材,主要药品有：干麦芽粉、干酵母、聚乙烯醇(PVA)、海藻酸钠、无水氯化
9、钙、蒸馏水、葡萄糖溶液、碘液,制备麦芽汁,活化酵母菌细胞,干酵母蒸馏水活化的酵母菌,配制物质的量浓度为 0.05 mol/L的氯化钙溶液,无水氯化钙蒸馏水,制备固定化细胞,浸泡凝胶珠，用蒸馏水洗涤,待凝胶珠在溶液中浸泡30 min后，取出并用蒸馏水洗涤3次备用,发酵麦芽汁,将凝胶珠加入无菌麦芽汁中,1.在酵母菌细胞的活化和配制CaCl2溶液时，都使用了蒸馏水，为什么不能使用自来水？ 答案 防止自来水中各种离子影响实验结果。 2.配制海藻酸钠溶液时加热是关键，为什么要用小火间断加热？ 答案 防止海藻酸钠溶液焦糊。 3.能否在刚溶化好的海藻酸钠溶液中加入活化的酵母菌细胞？ 答案 不能，因为刚溶化好
10、的海藻酸钠溶液温度较高，会将酵母菌细胞杀死。,答案,(1)固定化细胞与固定化酶的主要区别 固定化细胞使用的是活细胞，因而为了保证其生长、增殖的需要，应该为其提供一定的营养物质。 固定化细胞由于保证了细胞的完整性，酶的环境改变小，所以对酶的活性影响最小。 (2)凝胶珠的检测：刚形成的凝胶珠应在氯化钙溶液中浸泡一段时间，以便形成稳定的结构。检验凝胶珠的质量是否合格可以使用下列方法：一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，且没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功；二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的。,拓展应用,3.关于固定化酵母
11、菌细胞制备过程的叙述，正确的是 A.为使酵母菌活化，应让干酵母与自来水混合并搅拌 B.用小火或间断加热可防止海藻酸钠溶液焦糊 C.向刚溶化好的海藻酸钠溶液中加入已活化的酵母菌细胞，充分搅拌并混合均匀 D.将与酵母菌细胞混匀的海藻酸钠溶液倒入CaCl2溶液中，会观察到CaCl2溶液中有球形或椭球形的凝胶珠形成,答案,解析,解析 酵母菌细胞活化时，应让干酵母与蒸馏水混合并搅拌，A项错误； 配制海藻酸钠溶液时要用小火或间断加热的方法，否则海藻酸钠会发生焦糊，B项正确； 刚溶化的海藻酸钠应冷却后再与酵母细胞混合，否则温度过高会导致酵母细胞死亡，C项错误； 将与酵母菌细胞混匀的海藻酸钠溶液匀速滴入CaC
12、l2溶液中，D项错误。,4.下面是制备固定化酵母菌细胞的实验步骤，请回答下列问题： 酵母菌细胞的活化配制CaCl2溶液配制海藻酸钠溶液海藻酸钠溶液与酵母菌细胞混合固定化酵母菌细胞 (1)在 状态下，微生物处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复 状态。活化前应选择足够大的容器，因为酵母菌细胞活化时 。,答案,解析,缺水,正常(生活),体积会增大(增多),解析 酵母菌细胞在缺水的状态下休眠。活化是加入水使酵母菌恢复到生活状态。酵母菌细胞活化后体积会增大。,(2)固定化细胞技术一般采用包埋法，而固定化酶常用 和。 解析 固定化酶常用化学结合法和物理吸附法固定化。 (3)影响实验成败的关
13、键步骤是 。 解析 实验的关键是配制海藻酸钠溶液，得到凝胶珠。 (4)海藻酸钠溶化过程的注意事项是 。 解析 海藻酸钠溶化过程要小火、且间断加热、并不断搅拌，使海藻酸钠完全溶化，又不会发生焦糊。,答案,解析,化学结合法,物理吸附法,配制海藻酸钠溶液,小火加热(或小火间断加热)，不断搅拌,(5)如果海藻酸钠浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母菌细胞数目 。如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，说明 。 解析 海藻酸钠浓度过低，包埋的酵母菌就会过少；海藻酸钠浓度过高，不易与酵母菌混合均匀。 (6)该实验中CaCl2溶液的作用是 。 解析 CaCl2溶液能使海藻酸钠发生聚沉，形成稳定的结构。,答案,解析,
14、较少,(海藻酸钠浓度偏高)制作失败,使胶体聚沉(或形成稳定的结构),(1)固定酵母菌细胞的过程中三次使用到蒸馏水，请说出是哪三个环节？ 答案 酵母菌细胞的活化、配制CaCl2溶液以及配制海藻酸钠溶液定容时需要使用蒸馏水。 (2)本题中固定酵母菌细胞使用了海藻酸钠，固定化细胞还可以使用哪些固定化材料？ 答案 明胶、琼脂糖、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。,答案,(3)制备好的固定化酵母菌细胞可以用于酒精发酵，如果酵母菌细胞没有活化或溶化好的海藻酸钠溶液没有冷却就加入了酵母菌细胞，则对酒精发酵会产生怎样的影响？ 答案 如果酵母菌细胞没有活化，则仍处于休眠状态；如果溶化好的海藻酸钠溶液没有冷却就加入了酵母
15、菌细胞，则酵母菌细胞会被高温杀死。以上两种情况都会导致酒精发酵失败，而最终无酒精产生。,答案,课堂小结,包埋法,物理吸附法,化学结合法,包埋法,当堂检测,1.下列属于固定化酶应用特点的是 可以被反复利用 有利于酶与产物分离 能自由出入载体 一种固定化酶只催化一种酶促反应 酶多用包埋法固定化 A. B. C. D.,解析 酶被固定后可与产物分离，故可反复使用，但不能自由出入依附的载体。通常情况下固定化酶种类单一，所以不能催化一系列酶促反应，只催化一种或一类酶促反应。酶分子较小，不适合采用包埋法进行固定化。,2,3,4,5,1,答案,解析,2.下列关于使用固定化酶技术生产高果糖浆的说法，正确的是
16、A.高果糖浆的生产需要使用果糖异构酶 B.在反应柱内的顶端装上分布着许多小孔的筛板，防止异物进入 C.将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入，果糖从反应柱下端流出 D.固定化酶技术复杂，成本较高,答案,解析,2,3,4,1,5,解析 生产高果糖浆时所用的酶应为葡萄糖异构酶，将这种酶固定在一种颗粒状的载体上，再将这些酶颗粒装到一个反应柱内，柱子底端装上分布着许多小孔的筛板。酶颗粒无法通过筛板上的小孔，而反应溶液却可以自由出入。生产过程中，将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入，使葡萄糖溶液流过反应柱，与固定化葡萄糖异构酶接触，转化成果糖，从反应柱的下端流出。反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本。,2,3,4
17、,1,5,解析 为吸附法，为化学结合法，为包埋法，包埋于网格中，包埋于微胶囊中。,3.下图所示的几种固定方式中属于包埋法的一组是,答案,2,3,4,1,5,解析,A. B. C. D.,解析 海藻酸钠胶体在CaCl2这种电解质溶液的作用下，发生聚沉，形成凝胶珠，其作用机理是由于盐离子的电荷与胶体微粒电荷相互吸引，形成更大的胶体颗粒，类似于人体红细胞与抗凝集素之间的凝集反应。,4.在制备固定化酵母菌细胞的实验中，CaCl2溶液的作用是 A.用于调节溶液pH B.用于进行离子交换 C.用于胶体聚沉 D.用于为酵母菌提供Ca2,解析,2,3,4,1,答案,5,5.如图所示，图甲为人工种子生产过程示意
18、图，图乙为图甲中过程的相关操作。请据图回答下列问题： (1)图甲中，过程、分别称为 、 。,2,3,4,1,5,答案,解析,脱分化,再分化,2,3,4,1,5,解析 题图是利用植物组织培养技术生产人工种子及用海藻酸钠包埋人工种子的过程。过程、分别称为脱分化、再分化；海藻酸钠溶液的配制是固定化酵母菌细胞的关键，如果海藻酸钠溶液浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数量较少，都会影响实验效果。,(2)图乙中，包埋形成人工种子的过程中，先适当加热使海藻酸钠溶化，然后将溶化的海藻酸钠溶液，再加入 充分搅拌混合均匀。 (3)若用图乙的方法“制备固定化酵母菌细胞”，海藻酸钠溶液的浓度对实验结果影响较大，若浓度过高，则 ，通常评价该实验结果主要是观察凝胶珠的 。,冷却至室温,胚状体,不易形成凝胶珠,颜色和形状,2,3,4,1,5,答案,