1、第3课时 植物组织培养技术,第一章 无菌操作技术实践,学习导航 1.简述植物组织培养的原理和过程。 2.了解MS基本培养基贮备液的配制方法。 3.举例说出激素及其对脱分化、再分化的作用。 重难点击 理解植物组织培养的原理和一般过程。,一、植物组织培养技术,二、天竺葵的组织培养,内容索引,当堂检测,一、植物组织培养技术,基础梳理,1.含义：在 和人工控制的条件下，诱导 的植物器官、组织等在适宜的培养条件下发育成完整植株的技术。 2.原理：植物细胞的 。植物细胞的全能性是指植物体的每个体细胞都携带来自受精卵的 ，并具有发育成 的潜在能力。,无菌,离体,全能性,完整基因组,完整植株,3.过程,试管苗
2、,生根,分离接种,扦插、生根,4.激素与愈伤组织的再分化 (1)愈伤组织的细胞是一种具有 细胞。 (2)脱分化： 的植物细胞或组织产生 的过程。 (3)再分化：在一定条件下继续培养脱分化的 ，又可以重新诱导根、芽等器官的分化。,分生能力的薄壁,已经分化,愈伤组织,愈伤组织,(4) 是启动生长、细胞分裂、脱分化、再分化的关键激素。 生长素和细胞分裂素的使用比例对分化结果的影响,生长素、细胞分裂素,愈伤组织,根,芽,5.MS基本培养基贮备液的种类 (1)大量元素贮备液：其中含有的大量元素有 。 (2)微量元素贮备液：其中含有的微量元素有_。 (3)铁盐贮备液：是由FeSO47H2O和Na2EDTA
3、(乙二胺四乙酸二钠)配制而成。 (4)有机物贮备液：其中有机物有 、烟酸、肌醇、 、维生素B1。 6.贮备液的贮藏备用：分别用 贮存配制好的MS培养基贮备液，并贴上标签，注明编号、 、日期等，保存在 中备用。,N、P、S、K、Ca、Mg,Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、,Cl、Ni、I、Co,甘氨酸,维生素B6,玻璃瓶,配制倍数,冰箱的冷藏室,问题探究,1.完善植物组织培养过程图并思考下列问题：,答案,脱分化,再分化,愈伤组织,(1)为什么高度分化的植物细胞还具有全能性？ 答案 因为高度分化的植物细胞中含有该物种的全套遗传物质。,答案,(2)高度分化的植物细胞发育成完整的植株需要哪些条件？
4、答案 离体条件； 充足的营养条件； 恰当的激素种类及浓度配比； 适宜的环境条件； 无菌条件。,2.MS培养基的成分主要有哪些？还需添加哪些成分？ 答案 成分有大量元素、微量元素和有机物；还需添加植物激素及其他添加物(如甘氨酸、维生素等)。 3.植物组织培养的一般过程分析 (1)你认为植物组织培养的核心环节是什么？ 答案 植物组织培养的核心环节为脱分化和再分化。 (2)你认为植物组织培养的再分化应先诱导生芽还是先诱导生根？ 答案 应先诱导生芽，再诱导生根。 4.植物组织培养中应尽量选择什么样的材料作为外植体？为什么？ 答案 应尽量选择幼嫩的植物组织或器官作为外植体。因为外植体的年龄越小，分化程度
5、越低，组织培养的成功率就越高。,答案,(1)植物组织培养过程,(2)植物组织培养的过程分析,拓展应用,1.关于植物组织培养技术的叙述正确的是 A.用于培养的材料不一定需要离体 B.植物可通过光合作用合成有机物，培养基中不需要加入含碳有机物 C.愈伤组织可制造成人工种子 D.脱分化和再分化都需要培养基中生长素和细胞分裂素刺激、诱导,答案,解析,解析 用于培养的材料一定要离体，否则基因选择性表达会形成组织和器官，A项错误； 植物组织培养基中需加入含碳有机物，提供碳源和能源，而完整植株才能进行光合作用，B项错误； 胚状体可制成人工种子，C项错误； 不同阶段的培养基中细胞分裂素和生长素的比例不同，可诱
6、导培养物进行分裂和分化，D项正确。,解析 离体的植物组织或细胞，在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成愈伤组织。脱分化产生的愈伤组织继续培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。菊花茎尖能培养成植物体的根本原因是植物细胞具有全能性。,(1)图中A和B分别表示 和 。菊花茎尖培养成植物体的根本原因是 。,2.如图是基因型为AaBb的菊花茎尖离体培养示意图，据图回答下列问题：,答案,解析,脱分化,再分化,植物细胞具有全能性,解析 离体的植物组织和细胞，常用MS培养基培养，其主要成分包括：大量元素，如N、P、K、Ca、Mg、S；微量元素，如Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Co、I
7、；有机物以及蔗糖等。在试管苗形成过程中要每日给予日照12 h，其原因是试管苗形成过程中要进行光合作用合成有机物。,(2)菊花的组织培养形成试管苗的过程中，其中应大量供给的元素是 。试管苗形成过程中要给予一定光照，其原因是 。,答案,解析,N、S、P、K、Ca、Mg,试管苗形成过程中要进行光合作用合成有机物,(3)脱分化是指_。脱分化和再分化这两个过程的进行，除必要的温度、光照和氧气等外界条件外，还要保证 ，否则植物组织培养就不能成功。,答案,解析,已经分化的植物细胞或组织，通过离体培养产生愈伤组织,的过程,无菌,解析 脱分化和再分化这两个过程的进行除必要的温度、光照和氧气等外界条件外，还要保证
8、无菌，原因是杂菌产生的毒素等物质会影响或阻碍植物组织脱分化形成愈伤组织或再分化为根和芽，且杂菌的繁殖能力很强，会与植物组织争夺培养基中的营养物质，使植物得不到营养，同时杂菌还会侵染植株，使之受到伤害。,解析 由于植物组织培养过程中细胞进行有丝分裂，所以培养成的试管苗的基因型为AaBb。,(4)这样培养成的试管苗的基因型为 。,答案,解析,AaBb,植物组织培养的两点误区警示 (1)细胞全能性表达的理解 细胞全能性的表达是由单个细胞发育成完整个体，发育的终点是完整个体，若发育为某个器官或组织不属于细胞全能性的表达。 细胞全能性的大小是自然条件下的，在适宜外界条件下，植物的体细胞培养比生殖细胞的培
9、养更容易。 (2)对愈伤组织特点的理解：愈伤组织的细胞是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞，具有旺盛的分裂能力，无中央大液泡。,二、天竺葵的组织培养,基础梳理,1.组织培养过程 准备(器具准备、试剂准备)配制培养基 观察与记录转接培养。 2.MS培养基的配制 分别向MS基本培养基中添加所需的激素，配制诱导愈伤组织形成的培养基、诱导 的培养基、诱导 的培养基，搅拌均匀，再一次定容，按要求调节pH。,灭菌,取材与接种,分化芽,生根,3.灭菌 将培养基在 温度下湿热灭菌20 min。灭菌彻底的培养基用于天竺葵的组织培养。 4.取材与接种 (1)植物组织培养的各项操作均需在 中或超净工作台上进行。
10、 (2)取未开花天竺葵植株上生出的 的叶，用流水冲净后，消毒并切成约0.5 cm2的小块。 (3)接种在已经配制好的诱导 形成的培养基上，做好标记放在适宜条件下培养。,121 ,无菌室,幼嫩,愈伤组织,5.观察与记录：每天观察 的生长情况，记录愈伤组织的大小、质地、颜色等情况。 6.转接培养 将增长至一定体积的 转接到诱导 的培养基上，在1525 、光照强度为 的光照培养箱内继续培养。待愈伤组织分化出幼芽后，再转接至诱导 的培养基上继续培养。,外植体,愈伤组织,分化芽,1 0002 000 lx,生根,7.露地栽培 (1)一般要经过炼苗驯化的原因 组织培养得到的试管苗植株特点是 ，所处的环境是
11、_和有完全营养的条件，植株表面没有蜡质和 等保护组织，气孔没有关闭功能，有叶绿体但 ，在自然条件下会很快萎蔫甚至死亡。 (2)露地栽培的步骤：培育壮苗选用合适的移植基质移栽试管苗移栽后的 栽培。,非常嫩弱,恒温、高湿、,弱光、无菌,角质层,光合能力差,条件控制,问题探究,1.营养物质对组织培养的作用 (1)探讨MS培养基中各种营养物质的作用 大量元素和微量元素： 。 蔗糖： 。 甘氨酸、维生素等有机物：_。,提供植物细胞生活所必需的无机盐,提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压,主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢,途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求,(2)植物是自养生物，为什么用于植物组织培
12、养的MS培养基中需要加入有机物作为碳源？ 答案 通常植物体本身进行光合作用产生糖类，不需要外部供给糖，但植物组织培养利用的是离体组织或细胞，在其脱分化过程中不能进行光合作用合成糖类，因此必须在培养基中添加糖类，作为碳源和能源物质，同时维持培养基的渗透压。 (3)同微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？ 答案 微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养、无机盐混合物，包括植物生长必需的大量元素和微量元素两大类。,答案,2.植物激素在植物组织培养中的作用 (1)试说出植物激素在植物组织培养中的作用,促进细胞的伸长，促进愈伤组织和根的形成,促进
13、细胞的分裂，促进芽的分化和形成,(2)生长素和细胞分裂素使用顺序及比例对植物组织培养的影响 按照不同的顺序使用这两类激素，实验结果不同,细胞既分裂也分化,分化频率提高,当同时使用这两类激素时，两者用量的比值不同，植物细胞的发育方向不同,有利于芽的分化，抑制根的形成,有利于愈伤组织的生成,3.移栽前为什么必须进行试管苗的炼苗驯化？ 答案 试管苗生长在试管或培养瓶内的条件下，植物表面没有蜡质和角质层等保护组织，气孔没有关闭功能，有叶绿体但光合能力差，如不经过炼苗驯化，直接移栽到大田，在自然条件下会很快失水、萎蔫而死亡。,答案,拓展应用,3.生物工程的研究成果已经广泛应用于各个领域，目前科学家利用植
14、物的茎尖和叶片、茎段等，在无菌条件下，培养在玻璃器皿中人工配制的培养基上，使之发育成完整的植株。下图是运用该技术培养兰花植株的示意图。下列关于这种生物工程技术的叙述，错误的是,A.这种技术叫做植物组织培养，可以克隆生物体 B.过程的单细胞细胞质丰富，液泡小而细胞核大 C.用此方法克隆植物要尽量选择优良、细胞全能性表达不充分的材料 D.这种技术可与基因工程、航天工程结合培育高产、优质的作物品种,答案,解析,问题导析,答案,返回上页,问题导析 (1)植物组织培养过程中，细胞中的遗传物质一般 (填“会”或“不会”)发生改变，所以该项技术属于一种克隆技术。 (2)无论是脱分化还是再分化，都需要 素的调
15、节。 (3)通过基因工程将目的基因导入植物细胞后，必须采用_ 技术将植物细胞培养成植株。,不会,生长素和细胞分裂,植物组织培养,解析 过程的单细胞细胞质丰富，液泡小而细胞核大，这是胚性细胞(类似胚胎细胞)的特征，在适宜的培养基中，这种单细胞可发育成胚状体。要获得植物克隆的成功，应尽量选择优良、细胞全能性表达充分的材料。随着科技的发展，植物组织培养可与基因工程、航天工程结合培育高产、优质的作物品种。,返回上页,4.植物组织培养的培养基中加有植物激素。下表是培养基中两种植物激素在不同比例时的实验结果(其中6BA是细胞分裂素，IAA是生长素)。请分析完成下列问题：,(1)促进愈伤组织产生的条件是 ，
16、愈伤组织生长的条件是 。(2)芽的分化条件是 ，根的分化条件是 。,答案,解析,必须有细胞分裂素,细胞分裂素与生长素含量相等,解析 由表中实验1和实验3的数据显示，促进愈伤组织产生的条件是必须有细胞分裂素，愈伤组织生长的条件是细胞分裂素与生长素含量相等。,解析 由实验2和4可知，细胞分裂素的含量大于生长素的含量，促进芽的分化，生长素的含量大于细胞分裂素的含量促进根的分化。,细胞分裂素的含量大于生长素的含量,生长素的含量大于细胞分裂素的含量,(3)在植物组织培养中，脱分化可用的激素组合是实验 和实验 中的激素浓度关系，再分化时可用的激素组合是实验 和实验 中的激素浓度关系。整个实验表明，植物的生
17、根、发芽等生命活动是_的结果。,答案,解析,1,3,2,4,多种激素共同,作用,解析 表中1、3组激素的使用利于愈伤组织的形成与生长，即为脱分化。 2、4组激素的使用利于根或芽的分化，即为再分化。,(4)植物组织培养的培养基中，除激素外，还必须含有 ，它的成分至少应该含有 、 等。(5)判断愈伤组织是否产生的依据是看是否产生_的细胞。,答案,解析,营养物质,矿质元素,有机物,解析 植物组织培养的培养基中，除激素外，还必须含有营养物质，它的成分至少应该含有矿质元素、有机物等。,解析 愈伤组织是一种分化程度较低的细胞，是排列疏松而无规则、高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。,排列疏松而无规则、高度
18、,液泡化的呈无定形状态,课堂小结,离体,愈伤组织,再分化,试管苗,pH,温度,当堂检测,1.影响植物组织培养的因素包括 培养基的配制 外植体的选取 激素的使用 消毒 温度、pH、光照 A. B. C. D.,2,3,4,5,1,解析 植物组织培养过程受多种外界因素的影响，其中包括温度、光照、pH等，而培养基的成分、外植体的选取和消毒是否严格等也影响组织培养。,答案,解析,A.b过程发生了脱分化，在此过程中植物激素不发挥作用 B.c过程发生了再分化，是愈伤组织重新分化成根或芽等器官的过程 C.d过程是在胚状结构外包裹人工胚乳和人工种皮制成人工种子 D.人工种子可以解决有些作物品种繁殖能力差、结子
19、困难或发芽率低等问题,2.下面为植物组织培养过程图解，以下相关叙述错误的是,答案,解析,2,3,4,1,5,解析 在植物脱分化的b过程中，利用植物生长素、细胞分裂素等植物激素可以诱导植物细胞脱分化，因此在此过程中植物激素发挥重要作用。,2,3,4,1,5,3.下列哪组符合天竺葵组织培养的基本步骤 A.制备MS固体培养基外植体消毒接种培养移栽栽培 B.制备MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培移栽 C.制备MS固体培养基外植体消毒接种栽培培养移栽 D.制备MS固体培养基外植体消毒接种移栽培养栽培,答案,解析,2,3,4,1,5,解析 移栽是指将培养基上培养的幼苗长壮后移栽到土壤中，栽培是对移栽后的
20、幼苗进行精细管理培养的过程，应先移栽后栽培。,4.1958年，美国科学家斯图尔德应用植物组织培养技术，将二倍体胡萝卜韧皮部的一些细胞进行离体培养，最终发育成完整的新植株。下列关于这一科学事实的叙述中，错误的是 该实验证明了植物细胞具有全能性 此种生殖产生的后代有广泛的变异 韧皮部细胞通过减数分裂增加细胞数目 此种生殖产生的后代能保持亲本的性状 A. B. C. D.,解析,2,3,4,1,答案,5,解析 体细胞组织培养属于无性繁殖，其后代能保持亲本的性状，变异性小；体细胞不能进行减数分裂。,5.下图表示天竺葵的茎尖细胞通过无菌操作接种到试管培养基上后，在一定的条件下，形成试管苗的培育过程，请据
21、图回答下列问题：,答案,解析,2,3,4,1,5,(1)要促进细胞分裂生长，培养基中应有营养物质和激素。营养物质包括和小分子有机物，激素包括细胞分裂素和 两类植物激素。,无机物,生长素,解析 植物组织培养是用离体的植物组织、器官或细胞接种到经消毒灭菌的培养基中，培养基含有供组织细胞生长发育所需要的无机物和小分子有机物，还有调节细胞脱分化和再分化的细胞分裂素和生长素。由外植体发育成试管苗，脱分化阶段细胞进行有丝分裂，再分化阶段愈伤组织细胞经有丝分裂和细胞分化形成试管苗，此阶段需要光照，原因是叶肉细胞中叶绿素的合成需要光照条件。,2,3,4,1,5,(2)此过程依据的原理是 。 A和B阶段主要进行的分裂方式是_，B阶段除了细胞分裂外，还进行 细胞 等。 (3)此过程要无菌操作，主要是指对_进行灭菌消毒。B阶段需要光照，原因是_。 (4)试管苗的根细胞没有叶绿素，而叶的叶肉细胞具有叶绿素，这是基因_的结果。,细胞的全能性,有丝,分化,培养基,芽发育成叶，叶肉细胞中叶绿素的合成需要光照条件,选择性表达,2,3,4,1,5,分裂,答案,