1、 1.2 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得 1.下列关于微生物培养基种类划分的叙述，错误的是( ) A.培养基按其物理性质可以分为液体培养基和固体培养基 B.培养基按其化学成分可以分为天然培养基和合成培养基 C.培养基按其功能用途可以分为鉴别培养基和选择培养基 D.培养基按其营养构成可以分为含水培养基和无水培养基 2.如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，据图分析错误的是( ) A.获得图 A 效果的接种方法是稀释涂布平板法 B.获得图 B 效果的接种方法是平板划线法 C.若在纯化土壤细菌时菌液浓度过高，培养基上的菌落可能会连成一片
2、D.两种接种方式用到的工具相同 3.图甲是稀释涂布平板法中的部分操作，图乙是平板划线法的操作结果。下列叙述中错误的是( ) A.图甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能涂布菌液 B.图甲、乙操作中只有图甲可以用于微生物的计数 C.图乙中接种环需要灼烧 5 次 D.图乙中连续划线的起点是上一次划线的末端 4.下列有关涂布分离法的叙述错误的是( ) A.从土壤稀释液中取样时，不能只取悬液 B.接种时，涂布工具需先在酒精灯火焰上引燃 C.培养后菌落在整个平板表面分散均匀 D.涂布分离法比划线分离法更易获得单菌落 5.下列说法错误的是( ) A.因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物
3、，要按不同的稀释倍数进行分离 B.测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同 C.如果得到了 2 个或 2 个以上菌落数目在 30300 的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数 D.牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显少于选择培养基上的菌落数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落 6.下列有关血细胞计数板的叙述中，错误的是( ) A.利用血细胞计数板计数的方法属于显微镜直接计数法 B.血细胞计数板的一个方格网中有九个大方格 C.血细胞计数板上的双线用于区分大方格，单线用于区分中方格 D.用酒精清洗后的血细胞计数板可用绸布轻轻拭干 7.如图为“土壤中分
4、解尿素的细菌的分离和计数”实验示意图。据图分析下列叙述正确的是( ) A.3 号试管中样品的稀释倍数为 103倍 B.用 4 号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数约为 5 号试管的 10 倍 C.5 号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为 1.7 108个 D.该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高 8.下列关于微生物分离和培养的有关叙述，不正确的是( ) A.分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度 B.测定土壤样品中的活菌数目，常用显微镜直接计数 C.提纯和分离严格厌氧型微生物，一般不用稀释涂布平板法 D.分离能分解尿素的细菌，要以尿素为唯一氮源 9.有传言称手机屏幕比马桶
5、按钮单位面积上的细菌多， 为辨别真伪， 两电视台利用微生物培养技术进行实验，过程及结果如图所示。下列叙述错误的是( ) A.本实验采用稀释涂布平板法接种 B.本实验不需要设置对照组 C.本实验使用的培养基应含有水、碳源、氮源和无机盐等 D.两个报道结果不同，可能是因为取样环境不同 10.下列关于对分解尿素的细菌进行分离、计数的实验的叙述，错误的是( ) A.统计菌落数目时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面的一个菌落，一定来源于样品稀释液中的一个活菌 B.统计菌落数目时，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌 C.设置对照的目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的干扰 D.以尿
6、素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，通过检测培养基 pH 的变化，基本能准确鉴定培养基中的细菌就是能够分解尿素的菌种 11.检测土壤中细菌总数实验中，操作错误的是( ) A.本实验可以选用牛肉膏蛋白胨培养基，不可以采用平板划线法 B.取 104、105、106倍的土壤稀释液和蒸馏水各 0.1mL，分别涂布于各组平板上 C.将实验组和对照组平板倒置培养，防止水分过快蒸发 D.37恒温培养 2448 小时，确定对照组无菌后，选择菌落数在 30300 之间的实验组平板进行计数 12.下列有关稀释涂布平板法计数和显微镜直接计数法的描述不正确的是( ) A.利用血细胞计数板计数属于显微镜直接计数法，其
7、缺点是不能区分死菌与活菌 B.两种计数方法，其统计值与实际值相比，均有差异，但差异原因不同 C.两种计数方法均能在计数的同时观察到所研究微生物的形态特征 D.当菌落数目稳定时，一般选取菌落数为 30300 且数目差异不大的平板进行计数 13.下列有关“微生物的分离与培养”实验的叙述正确的是( ) A.高压蒸汽灭菌锅加盖时应按顺时针方向依次旋紧每一个螺旋 B.选择培养基可以鉴定某种微生物的种类 C.对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记 D.利用平板划线法可对微生物进行接种、纯化、分离和计数 14.为比较洗手前后指尖的微生物的情况，某同学进行了如下实验:首先将 5 个手指尖在
8、贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下，然后用肥皂将该手洗干净，再将 5 个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。下列相关叙述错误的是( ) A.实验中需要进行灭菌处理的材料用具有培养皿和培养基 B.贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落可能较少 C.将指尖在培养基上轻轻按一下相当于微生物培养中的接种 D.实验中用肥皂将手洗干净即进行了无菌操作 15.如图表示某同学从土壤中筛选出能降低尿素含量的菌株的实验流程。请回答下列有关问题： （1）实验中应用以_为唯一氮源的培养基筛选能分解尿素的细菌。从功能上讲，该培养基属于_培养基。 （2）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养。在稀释土壤溶液
9、的过程中每一步都要在_旁进行操作。稀释处理的目的是_；将接种后的培养皿倒置放在温度适宜的恒温箱中培养，平板倒置培养的目的主要是_。 （3）在培养基中加入酚红指示剂，若培养基中存在分泌脲酶的细菌，其菌落周围会出现_，这是因为尿素被分解成_后，使培养基中所加的酚红指示剂产生颜色变化。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力越_。 （4）分离细菌时使用固体培养基的原因是_。 答案以及解析答案以及解析 1.答案：D 解析：甲瓶是密封的，是缺氧环境，应是果酒发酵。丙装置通入无菌空气，是果醋发酵。乙瓶为发酵瓶，A正确。乙瓶中需要加入的微生物为醋酸菌，是原核生物，无线粒体，B 错误。微生物发酵产生醋酸需要有氧
10、环境，C 错误。只有甲瓶中会进行无氧呼吸产生酒精，滴加重铬酸钾溶液会出现灰绿色。D 错误。 2.答案：D 解析：两种接种方式用到的接种工具不同，获得图 A 效果的接种方法是稀释涂布平板法，接种工具是涂布器，获得图 B 效果的接种方法是平板划线法，接种工具是接种环，A、B 正确，D 错误；稀释涂布平板法纯化微生物时，如果菌液浓度过高会使细菌细胞连在一起，形成的菌落也会连成片，平板划线法纯化微生物时，如果蘸取的菌液浓度过高也会使部分菌落连在一起，C 正确。 3.答案：C 解析： 为防止杂菌污染， 题图甲中的涂布平板操作， 涂布前要将涂布器灼烧， 冷却 810 s 后才能进行涂布，若灼烧后立即涂布，
11、则会将菌体杀死，A 正确；题图甲是稀释涂布平板法，在稀 释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，通过统计菌落数，可以推测出菌液中微生物的数量，题图乙是平板划线法，用于菌种的分离纯化，无法计数，因此只有题图甲可以用于微生物的计数，B 正确；题图乙平板划线法中，在每次划线前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环，题图乙总共划线 5 次，接种环需要灼烧 6 次，C 错误；题图乙中连续划线的起点是上一次划线的末端，这样能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个活菌繁殖而来的菌落，D 正确。 4.答案：A 解析：从土壤稀释
12、液中取样时，只取悬液，A 错误；接种时，由于玻璃刮刀用前浸泡在 70%酒精中，因此涂布时需将玻璃刮刀在酒精灯上引燃，去除玻璃刮刀上的酒精，B 正确；涂布分离后菌种均匀分布于培养基表面，C 正确；由于涂布法操作之前，菌种已经过梯度稀释，菌种密度相对较低，更容易获得单菌落，D正确。 5.答案：D 解析：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目。实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落在 30300 之间适于计数的平板。土壤中不同类型的微生物的数量不同，因此在测定其数量时，选用的稀释范围也不同。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的
13、数目，从而说明选择培养基的筛选作用。 6.答案：C 解析： 显微镜直接计数是测定细菌数量的常用方法， 利用血细胞计数板计数的方法属于显微镜直接计数法；血细胞计数板的一个方格网中有九个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供计数微生物用；血细胞计数板上的双线用于区分中方格，单线用于区分小方格；用酒精清洗后的血细胞计数板可用绸布轻轻拭干。 7.答案：B 解析： 将 10g 土样加入到 90mL 无菌水中后,土样稀释 10 倍,再经 3 次 10 倍稀释得到 3 号试管中的样品,故 3号试管中样品的稀释倍数是 104倍,A 错误;4 号试管中稀释液进行平板培养,其稀释倍数为 5 号试管的 10
14、倍,如果稀释倍数适当,操作等正确,其得到的菌落平均数可能是 5 号的 10 倍,B 正确;5 号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明,每克土壤中的菌株数为 (168+175+167) 3 0.1 106=1.7 109(个),),C 错误;稀释涂布平板法得到的菌落可能存在两个或多个细菌长成一个菌落的情况,因此该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低,D 错误。 8.答案：B 解析：土壤中不同徽生物的密度不同，因此为了获得菌落数在 30300 之间的平板，分离土壤中不同的微生物时要采用不同的稀释度，A 正确；利用显微镜直接计数不能区分微生物的死活，因此测定土壤样品中的 活菌数，常用稀释涂
15、布平板法进行计数，B 错误；稀释涂布平板法进行梯度稀释、涂布操作时，菌种会接触空气因此提纯和分离严格厌氧型微生物时一般不用稀释涂布平板法，C 正确；以尿素作为唯一氮源的培养基上只允许能分解尿素的细菌生长繁殖，因此分离能分解尿素的细菌，要以尿素为唯氮源，D 正确。 9.答案：B 解析：由图可知，本实验采用了稀释涂布平板法接种，A 正确；为了确定是否出现杂菌污染，本实验需要设置对照组，B 错误；本实验使用的培养基应含有水、碳源、氮源和无机盐等，C 正确；通过观察菌落的形态、大小，可知手机屏幕和马桶按钮上都存在多种微生物，两实验操作均正确且操作完全一致，但报道结果截然不同，可能是手机的取样点和马桶的
16、取样点都不相同，D 正确。 10.答案：A 解析：用稀释涂布平板法进行微生物计数时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面的一个菌落，往往来源于样品稀释液中的一个活菌，但当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的也只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，只能推测出样品大约含有多少活菌，A 错误，B 正确；实验时，需要设置不接种的培养基与实验组一起培养作空白对照，设置对照的目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的干扰，C 正确；尿素分解菌产生的脲酶能够将尿素分解为氨，使 pH 升高，培养基中加入的酚红指示剂呈红色，D 正确。 11.答案：B 解析：本题考查微生物的培养与计数实验。 检测
17、土壤中细菌总数，需要用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，且应采用稀释涂布平板法来计数，平板划线法不能用来计数，A 正确；取 104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各 0.1mL，分别涂布于各组平板上，B 错误；将实验组和对照组平板倒置培养，可以防止水分过快蒸发，C 正确；在确定对照组无菌后，选择菌落数在 30300 的实验组平板进行计数，D 正确。 12.答案：C 解析：显微镜直接计数法无法区分死菌和活菌，A 正确；稀释涂布平板法计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的往往是一个菌落，故而统计值比实际值小，显微镜直接计数时，不能区分死菌和活菌，故测定的微生物数量往往大于实际的活菌数
18、，因此两种计数方法，其统计值与实际值相比，均有差异，但差异原因不同，B 正确；稀释涂布平板法计数时观察到的是菌落的形态特征，而不是微生物的形态特征，显微镜直接计数时观察到的是微生物的形态特征，C 错误；当菌落数目稳定时，一般选取菌落数为30300 且数目差异不大的平板进行计数，D 正确。 13.答案：C 解析： 14.答案：D 解析：实验中需要进行灭菌处理的材料用具有培养皿和培养基，A 正确；用肥皂将该手洗干净再进行实验，菌落可能较少，B 正确；将指尖在培养基上轻轻按一下相当于微生物培养中的接种，C 正确；实验中用肥皂将手洗干净，并不能杀死所有的微生物，所以不属于无菌操作，D 错误。 15.答
19、案：（1）尿素；选择 （2）酒精灯火焰；得到单个菌落；防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染 （3）红色环带；氨；强 （4）固体培养基上细菌分裂产生的子代个体不易分散，从而形成菌落 解析：（1）欲筛选出分解尿素的细菌，培养基中应以尿素为唯一氮源，不能降解尿素的细菌在此培养基上不能生存，这类培养基属于选择培养基。 （2）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养，为避免杂菌污染，每一步操作都要在酒精灯火焰旁进行。为了得到单个菌落，需将土壤溶液进行一系列的梯度稀释。为防止水蒸气在皿盖上凝结成水滴并落入培养基造成污染，培养皿需要倒置在恒温培养箱中培养。 （3）细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨使培养基 pH 升高，酚红指示剂变红。变色区域越大，说明该菌分解尿素的能力越强。 （4）细菌在液体培养基中分散生长，难以形成单个菌落，而在固体培养基上可以形成肉眼可见的菌落。