1、第第 2 2 课时课时 微生物的选择培养和计数微生物的选择培养和计数 A 组 基础对点练 题组一 选择培养基和微生物的选择培养 1(2020 山西大同月考)分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是( ) 选项 尿素 琼脂 葡萄糖 硝酸盐 A B C D 注：“”表示加入，“”表示不加。 答案 C 解析 分离土壤中分解尿素的细菌，应在固体培养基中培养，培养基中要有碳源，且尿素作为唯一的氮源，故不能添加硝酸盐。 2尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制选择培养基时( ) A葡萄糖在培养基中越多越好 B尿素分解菌有固氮能力，故培养基中只需无机氮 C尿素在培养基中越少越好 D尿素分解菌无固氮能力，故培养
2、基中的尿素为化合态氮 答案 D 解析 尿素既可以作为尿素分解菌的氮源，也可以作为其碳源，葡萄糖在培养基中并不是越多越好，葡萄糖过多会使培养基的渗透压过高，不利于尿素分解菌的生长繁殖，A 错误；尿素分解菌没有固氮能力，故培养基中需要添加尿素作为氮源，B 错误；添加尿素的目的是筛选尿素分解菌，其他微生物不能很好地生活在该培养基上，尿素在培养基中不是越少越好，过少就会失去选择作用，过多又会使细胞失水死亡，C 错误。 3 通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。 在缺乏氮源的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌生长；在培养基中加入 10%的酚可以抑
3、制细菌和霉菌生长。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分离出( ) 大肠杆菌 霉菌 放线菌 固氮细菌 A B C D 答案 B 解析 在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，但固氮细菌能生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌生长， 从而分离出霉菌； 10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长，从而分离出放线菌。 4平板划线法和稀释涂布平板法是接种微生物的两种常用方法，下列描述正确的是( ) A采用稀释涂布平板法获得的菌落数往往多于实际的活菌数 B平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环连续划在固体培养基表面 C稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基中进行培养 D与平板划线法相比，稀释
4、涂布平板法形成单菌落的效果更好 答案 D 解析 由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以利用稀释涂布平板法获得的菌落数往往少于实际的活菌数，A 错误；平板划线法不需要稀释菌液，是将菌液通过接种环连续划在固体培养基表面，B 错误；稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液涂布到固体培养基中进行培养，C 错误。 5 (2019 四川资阳期中)平板划线法和稀释涂布平板法是常用的两种接种方法。 下列相关叙述中错误的是( ) A平板划线法要求在培养基表面连续划线，且除第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的终点 B除第一次划线前需要将接种环灼烧灭菌外，以后的划线可以不用灭菌 C如果菌
5、液本来浓度不高，则可以适当降低稀释倍数 D“充分稀释”和“连续划线”的目的都是获得由单一细胞繁殖而成的菌落 答案 B 解析 将接种环灼烧灭菌并冷却后蘸取菌液进行第一次划线，以后的每一次划线前都要将接种环进行灼烧灭菌，B 错误。 题组二 微生物的数量测定 6 如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中样品稀释示意图。 据图分析错误的是( ) A3 号试管中样品液的稀释倍数为 104倍 B对 4 号试管中的稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能恰为 5 号试管的 10 倍 C5 号试管的结果表明每克土壤中的活菌数为 1.7108 D该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低 答案 C
6、解析 5 号试管的结果表明每克土壤中菌株数为(168175167) 3 0.11061.7109，C错误；用这种计数方法得到的结果往往比活菌的实际数目低，因为有可能多个细菌形成一个菌落，D 正确。 7 (2019 河北清河中学段考)下列是关于测定土壤中细菌总数实验操作的叙述， 其中错误的是( ) A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经湿热灭菌后倒平板 B取 1104、1105、1106倍的土壤稀释液和无菌水各 0.1 mL，分别涂布于各组平板上 C将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养 2448 h D确定对照组无菌后，选择菌落数在 300 以上的实验组平板进行计数 答案 D 解析 测定土壤中
7、细菌总数时，培养细菌所使用的培养基应该是标准培养基，并要经过湿热灭菌处理；涂布时要对样本的水溶液进行稀释，一般选取 1104、1105、1106倍的土壤稀释液各 0.1 mL 进行涂布；培养一段时间后，如果平板上菌落个数在 30300 之间，即可把该组所有平板的菌落计数，然后取其平均值，即可计算出土壤细菌的总数。 8(2020 启东测试)下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是( ) A显微镜直接计数法统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和 B当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落 C为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数 D在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数
8、差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果 答案 C 解析 一般选择菌落数在 30300 之间的平板进行计数，密度过大会影响结果的准确性。 9 (2019 宜宾期中)下图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的过程示意图， 下列有关叙述错误的是( ) A在配制步骤的培养基时，应先调 pH 后湿热灭菌 B步骤纯化分解尿素细菌的原理是将聚集的细菌分散，以获得单菌落 C步骤采用稀释涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素 D步骤挑取中不同种的菌落分别接种，比较不同种细菌分解尿素的能力 答案 C 解析 配制培养基时，应先调 pH 后进行湿热灭菌，A 正确；步骤纯化分解尿素细菌的原理是将聚集的
9、细菌通过稀释涂布平板法逐步分散，获得单菌落，B 正确；步骤筛选分解尿素细菌的培养基中，应以尿素为唯一氮源，不能含有其他氮源，C 错误。 10自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。 实验步骤： (1)制备稀释倍数为 1102、1103、1104、1105、1106的系列稀释液。 (2)选用_法接种样品。 (3)适宜温度下培养。 结果分析： (1)某同学在稀释倍数为 105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为 234，那么每毫升样品中的活菌数是(涂布平板时所用稀释液的体积为 0.2 mL)_
10、个。 (2)用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量_，因为_ _。 (3)某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？为什么？_。 答案 实验步骤：(2)稀释涂布平板 结果分析： (1)1.17108 (2)多 当两个或多个细胞连在一起时， 平板上观察到的是一个菌落 (3)不能。因为不能排除杂菌来自培养基或培养过程 解析 实验步骤：(2)若要对大肠杆菌进行计数，常用稀释涂布平板法接种样品。 结果分析：(1)每毫升样品中活菌数平均菌落数/稀释液体积稀释倍数，即 234 0.21051.17108(个)。(2)由于菌落可能由两个或多个细
11、胞连在一起生长而成，所以实际活菌数量比测得的数量多。(3)污染的原因可能是菌种不纯，也可能是培养基灭菌不彻底或接种过程操作不当。 B 组 综合强化练 11在农田土壤的表层自生固氮菌较多。将用表层土制成的土壤稀释液接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是( ) 加抗生素 不加抗生素 加氮源 不加氮源 加葡萄糖 不加葡萄糖 A B C D 答案 C 解析 自生固氮菌是以 N2为氮源， 以土壤基质中的有机物为碳源和能源的细菌， 所以要将其与其他细菌分开，所用的特制培养基中不需另加氮源；细菌对抗生素敏感，所以为了使自生固氮菌正常生活，不能加入抗生素。 12(2020 荆
12、州中学期末)下列有关微生物分离和培养的叙述，错误的是( ) A微生物培养前，需对培养基进行消毒 B测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法 C分离土壤中不同的微生物，需采用不同的稀释度 D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源 答案 A 解析 消毒不能杀死培养基中的所有微生物，应采用湿热灭菌法对培养基进行彻底灭菌。 13下列有关稀释涂布平板法操作的叙述，不正确的是( ) A若稀释梯度以 10 倍为单位，当用移液管取 1 mL 原始菌液进行稀释时，其余试管内的无菌水应为 9 mL B每次用灭菌后的移液管取菌液前，要先将菌液混匀 C在涂布过程中，每次变换涂布的方向和位置时，应对涂
13、布器进行灼烧灭菌 D将菌液涂布在培养基表面时，为使涂布均匀，应及时转动培养皿 答案 C 解析 在涂布前，应将涂布器在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，用涂布器将菌液均匀涂布在培养基的表面，涂布结束后，应对涂布器进行灼烧灭菌，以防污染环境和感染操作者，C 错误。 14下图表示从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。下列与该实验相关的叙述中不正确的是( ) A实验中所用的培养基均属于选择培养基 B图中、过程实现了对目标微生物的稀释 C统计处培养基中的菌落数并不一定代表接种到上的活菌数 D在处培养基上形成菌落的微生物同化作用类型为异养型 答案 B 解析 该实验的目的是从土壤中
14、分离能分解对羟基苯甲酸的微生物，所以使用的培养基为选择培养基，A 项正确；图中、过程为选择培养，目的是增大所分离的微生物的浓度，B项错误；处的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，C 项正确；所分离的微生物利用现成的有机物生长繁殖，所以该微生物的同化作用类型为异养型，D 项正确。 15下列有关微生物分离、培养和计数的叙述，正确的是( ) A分离土壤中微生物时，需要先对土壤灭菌，再进行培养 B测定土壤中细菌数量时，一般选用 11031107倍的稀释液 C测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法或平板划线法进行计数 D统计菌落数目时，当样品
15、的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落 答案 D 解析 分离土壤中微生物时，需要对培养基灭菌，但不能对土壤样品进行灭菌，A 错误；由于土壤中各类微生物的数量不同，在进行分离和计数时，需要按照不同的稀释度分别进行涂布，测定土壤中细菌的数量，一般选用 1104、1105、1106倍的稀释液，B 错误；测定土壤样品中的细菌数目常用稀释涂布平板法，平板划线法不能用于计数，C 错误。 16下列有关稀释涂布平板法的说法中，错误的是( ) A用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻压移液管的橡皮头，吹吸三次，目的是使菌液与水充分混匀 B移液管需经过灭菌 C试管口与移液管应在离火焰 12 cm
16、 处 D涂布时可转动涂布器，使菌液涂布均匀 答案 D 17塑料袋自然降解需 201 000 年不等，某生物小组依照下列实验方案从土壤中找到了一类假单胞杆菌，能将聚乙烯塑料的自然降解过程缩短至 3 个月(如下图)。据此，请回答下列问题： (1)号培养基属于_培养基(按功能分)， 其中除水、 无机盐、 氮源外， 还应添加_粉作为唯一碳源。 (2)图中“”表示对土壤悬浮液进行充分地_，目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在号培养基表面形成单个_。 (3)号培养基上采用的接种方法为_法，一般还需在号培养基上添加_等凝固剂。 (4)在培养过程中，可设置一个接种_的培养基作为对照组，证明培养过
17、程中没有杂菌污染；可设置一个_培养基作为对照组，说明号培养基的作用。 答案 (1)选择 聚乙烯塑料 (2)稀释 菌落 (3)稀释涂布平板 琼脂 (4)无菌水 牛肉膏蛋白胨(或含普通碳源的) 18(2020 山东烟台一模)分解尿素的细菌广泛存在于农田等土壤中，某生物实验小组尝试对分解尿素的细菌进行分离与计数，请回答下列问题： (1)分解尿素的细菌含有的酶是_，为筛选出能分解尿素的细菌，配制培养基时应以_作为唯一氮源，因此该培养基属于_培养基。 (2)常用来统计样品中活菌数目的方法是_。 (3)该小组对分解尿素的细菌进行计数时，在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是_。
18、将 1 mL 样液稀释 104倍，在 3 个平板上分别涂布 0.1 mL 稀释液；经适当培养后，统计活菌数目，每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数目， 最后选取_作为结果。 如果3个平板的菌落数分别为39、42 和 45，据此可得出每毫升样液中活菌数为_。 答案 (1)脲酶 尿素 选择 (2)稀释涂布平板法 (3)检验平板灭菌是否彻底 菌落数目稳定时的记录 4.2106 解析 (1)分解尿素的细菌含有脲酶，要筛选出能分解尿素的细菌，应该用以尿素为唯一氮源的选择培养基。(2)接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可用于微生物计数。(3)该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，用于检测平板灭菌是否彻底。经适当培养后，统计活菌数目，每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。3 个平板的菌落分别为 39、42 和 45，据此可得出每毫升样液中活菌数(394245) 3 0.11044.2106。