1、章末总结章末总结 一、几种相关的酶 1.几种酶的比较 项目 种类 作用底物 作用部位 作用结果 限制性内切酶 DNA 分子 磷酸二酯键 形成黏性末端(或平末端) DNA 连接酶 DNA 分子片段 磷酸二酯键 形成重组 DNA 分子 DNA(水解)酶 DNA 分子 磷酸二酯键 形成脱氧核糖核苷酸 解旋酶 DNA 分子 碱基对间的氢键 形成单链 DNA 分子 2.上述四种酶的作用部位 限制性内切酶、DNA 连接酶、DNA(水解)酶作用于部位，解旋酶作用于部位。 例 1 下图为 DNA 分子的某一片段，其中分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶 依次是( ) A.DNA 连接酶、限制性内切酶、解旋酶
2、B.限制性内切酶、解旋酶、DNA 连接酶 C.解旋酶、限制性内切酶、DNA 连接酶 D.限制性内切酶、DNA 连接酶、解旋酶 答案 C 解析 使碱基对间的氢键断裂的是解旋酶，将特定部位的相邻两脱氧核糖核苷酸之间的磷酸 二酯键断开的是限制性内切酶；连接 DNA 片段间磷酸二酯键的是 DNA 连接酶。 例 2 某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶(Amy)基因 a，通过基因工程的方法，将基因 a 与运载体结合后导入马铃薯植株中， 经检测发现 Amy 在成熟块茎细胞中存在。 下列有关这一 过程的叙述不正确的是( ) A.获取基因 a 的限制性内切酶的作用部位是图中的 B.基因 a 进入马铃薯细胞后，可
3、随马铃薯 DNA 分子的复制而复制，传给子代细胞 C.连接基因 a 与运载体的 DNA 连接酶的作用部位是图中的 D.通过该技术人类实现了定向改造马铃薯的遗传性状 答案 C 解析 DNA 连接酶和限制性内切酶的作用部位都是磷酸二酯键，即图中部位。 二、启动子、终止子、起始密码子、终止密码子 1.从定义上区分 (1)启动子：位于编码区上游紧靠转录起点的位置。它的主要功能是引导 RNA 聚合酶与基因 的正确部位结合。只有在启动子存在时，RNA 聚合酶才能准确地从转录起点开始，沿着编码 区正常地进行转录。 (2)终止子：位于编码区下游紧靠转录终点的位置。它的特殊的碱基排列顺序能够阻碍 RNA 聚合酶
4、的移动，并使其从 DNA 模板链上脱离下来。 (3)密码子：指信使 RNA 上决定一个氨基酸的三个相邻的碱基。 信使 RNA 上四种碱基的组合 方式有 64 种，其中，决定氨基酸的密码子有 61 种，3 种是终止密码子。 (4)终止密码子：是信使 RNA 上能够终止蛋白质合成的密码子。 (5)起始密码子：位于信使 RNA 上，是蛋白质合成开始的信号，有两种：AUG、GUG。 2.从本质上区分： 启动子和终止子都是 DNA 分子中具有调控作用的脱氧核糖核苷酸序列， 而 起始密码子和终止密码子都位于信使 RNA 上，分别是翻译的起始位置和终止位置，终止密 码子不能决定任何一种氨基酸。 对于相似或相
5、关概念， 通过比较分析的方法找出区别与联系， 会加深对这些知识的理解与掌握。 例 3 基因表达载体中启动子的作用是( ) A.使目的基因的导入更容易 B.具有 RNA 聚合酶的结合部位，启动转录过程 C.鉴别受体细胞是否导入目的基因 D.具有 DNA 聚合酶的结合部位，启动复制过程 答案 B 解析 启动子在表达载体中位于目的基因的首端，具有 RNA 聚合酶的结合部位，可启动转 录过程。 三、基因工程的基本操作程序归纳 1.目的基因的获得 (1)直接分离法：从自然界已有的物种中分离。 (2)人工合成目的基因 直接利用 DNA 合成仪用化学方法合成，不需要模板。 以 RNA 为模板，在反转录酶作用
6、下人工合成。 利用 PCR 技术获得。 2.基因表达载体的构建重组质粒的构建 (1)表达载体的组成：目的基因启动子终止子报告基因。 (2)基因表达载体的构建 3.目的基因的导入转化 (1)导入方法 植物：农杆菌介导的遗传转化法、基因枪法、 花粉管通道法 动物：显微注射技术 微生物：氯化钙法 (2)受体细胞：植物：可以是卵细胞(受精卵)、体细胞(可经组织培养成为完整个体)。 动物：受精卵(因为体细胞的全能性受到限制)。 4.目的基因的检测与表达产物的测定 (1)形态检测 如果目的基因的表达产物具有明显的表型性状，可以 根据目标性状的有无来判断目的基因是否表达。 如果目的基因没有明显的表型，在构建
7、表达载体时，通常把一个报告基因与目的基因连在 一起，检测目的基因的表达。 (2)分子检测：RCR 检测；分子杂交检测。 例 4 如图是将人的生长激素基因导入细菌 B 细胞内制造“工程菌”的示意图。 已知细菌 B 细胞内不含质粒 A，也不含质粒 A 上的基因。判断下列说法正确的是( ) A.将重组质粒导入细菌 B 常用的方法是显微注射法 B.将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质 粒的细菌 C.将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的就是导入了质粒 A 的细菌 D.目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长 答案 C