1、章末总结章末总结 知识建网 要语必背 1植物组织培养就是在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工 配制的培养基上，给予适宜的培养条件，最终诱导产生愈伤组织、丛芽或完整植株的技术。 2植物组织培养中常用的基本培养基有 MS 培养基、怀特培养基、N6培养基等。其中 N6培 养基常用于花药的组织培养。 3电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使 带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 4 同工酶是指催化相同的化学反应而酶蛋白的分子结构、 理化性质乃至免疫学性质不同的一 组酶。 5DNA 片段的 PCR 扩增可以利用 PC
2、R 热循环仪完成，而产物的检测则利用琼脂糖凝胶电 泳进行。 6PCR 原理：DNA 热变性原理，PCR 每次循环都包括变性、复性和延伸三步。 一、组织培养中污染的预防 1污染有两种类型 (1)细菌污染。菌斑呈黏液状，界限比较明显，一般接种后 12 天即能发现。主要是大肠杆 菌和链球菌，一般是由接种人员造成的。 (2)真菌污染。菌斑呈绒毛状、絮状，界限不明显，伴有不同颜色的孢子，接种后 310 天才 能发现。主要是霉菌污染，可能是植物材料灭菌不当造成的。 2预防措施 (1)防止外植体带菌：选择好外植体采集时期和采集部位。外植体采集以春秋为宜，优先选 择地上部分作为外植体，阴雨天勿采，晴天下午采，
3、采前喷杀虫剂、杀菌剂或套塑料袋。 在室内或无菌条件下进行预培养。外植体严格消毒。 (2)保证培养基及接种器具彻底灭菌：分装时，注射器勿与瓶接触，培养基勿粘瓶口。检 查封口膜是否有破损。扎瓶口要位置适当、松紧适宜。保证灭菌时间和高压锅内温度。 接种工具用前彻底灭菌。工作服、口罩、帽子等布质品定期进行湿热灭菌。 (3)操作人员严格遵守无菌操作规程。如一定要规范着装，操作过程中不说话等。 (4)保证接种与培养环境清洁：污染瓶经高压灭菌后再清洁。接种环境定期熏蒸消毒、紫 外灯照射或用臭氧灭菌和消毒。定期对培养室消毒、防止高温。 例 1 关于接种时应注意的事项，全部正确的为( ) 接种室要消毒 无菌操作
4、 接种时可以谈话 外植体如茎段、茎尖可随机放入培养 基 接种时要防止交叉污染 接种完立刻盖好瓶口 A B C D 答案 D 解析 整个接种过程必须在无菌条件下进行，不能谈话，防止呼吸产生污染。因此操作过程 应禁止谈话，并戴口罩；接种的外植体放入培养基时注意将形态学下端插入，而且分布均匀， 不能随机放入，以保证必要的营养面积和光照条件。 二、PCR 技术、蛋白质分离之间的比较 项目 PCR 技术 蛋白质分离 实验原理 利用 DNA 热变性原理体外扩增 DNA 依据相对分子质量的大小分离蛋白质 实验过程 变性复性延伸 样品处理及粗分离凝胶色谱操作 变性胶电泳 实验结果 获得大量 DNA 相对分子质
5、量不同的蛋白质得以分离 实验意义 解决了 DNA 研究中材料不足的问题 为蛋白质的研究和利用提供了原材料 例 2 如图是 PCR 技术示意图，请据图回答下列问题： (1)标准的 PCR 过程一般分为_、_、_三大步骤。 (2) 引 物 是 此 过 程 中 必 须 加 入 的 物 质 ， 从 化 学 本 质 上 来 说 ， 引 物 是 一 小 段 _。 (3)将双链 DNA_，使之变性，从而导致_。 (4)引物延伸需提供_作为原料。 答案 (1)变性 复性 延伸 (2)单链 DNA 或 RNA (3)加热到 94 双链 DNA 解开形成两条单链 (4)四种脱氧核苷酸 三、DNA 体内复制与体外复
6、制(PCR)的比较 PCR 技术是一种体外迅速扩增 DNA 片段的技术， 与细胞内 DNA 复制的过程相比既有相同点 又有不同点，通过列表比较的方法准确掌握两者的异同，是防止此类问题出错的重要措施。 细胞内 DNA 复制与体外 DNA 扩增(PCR)的比较 项目 细胞内 DNA 复制 PCR 不 同 点 解旋 在解旋酶作用下边解旋边复制 94 高温解旋、双链完全分开 酶 解旋酶、DNA 聚合酶 Taq DNA 聚合酶 引物 RNA 一般为单链 DNA 能量 ATP dNTP 温度 体内温和条件 高温 循环次 数 受生物自身控制 三十多次 相同点 需提供 DNA 复制的模板 四种脱氧核苷酸作原料
7、 子链延伸的方向都是从 5端到 3端 都需要酶的催化 例 3 PCR 过程与细胞内的 DNA 复制过程相比，主要有两点不同，它们是( ) PCR 过程需要的引物一般是人工合成的单链 DNA PCR 过程不需要 DNA 聚合酶 PCR 过程中 DNA 的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的 PCR 过程中，DNA 不需要解旋，直接以双链 DNA 为模板进行复制 A B C D 答案 C 解析 PCR 过程与细胞内的 DNA 复制过程相比较，主要有两点不同：(1)PCR 过程需要的引 物一般是人工合成的单链 DNA，长度通常为 2030 个核苷酸。(2)PCR 过程中，DNA 解旋 不依赖解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的。