1、第一节第一节 微生物的分离和培养微生物的分离和培养 课后分层训练 (时间：25 分钟) 对点强化 强化点 1 固体培养基的制备 1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( ) A.计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B.计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C.计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D.计算、称量、灭菌、溶化、倒平板 解析 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基， 应先根据需要计算各成分用量， 然后称量、 溶化、灭菌、倒平板。 答案 C 2.下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是( ) A.培养基应先调 pH 再进行灭菌 B.培养基应先灭菌再分装到培养皿 C.溶化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦 D
2、.高压蒸汽灭菌锅加盖时应按顺时针方向依次旋紧螺栓 解析 培养基应先调 pH 再进行灭菌，否则会被污染，A 正确；培养基应先灭菌 再分装到培养皿，B 正确；溶化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦，C 正确；高压 蒸汽灭菌锅加盖时，将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内，再以两两对 称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气，D 错误。 答案 D 强化点 2 无菌技术 3.煮沸消毒法与巴氏消毒法的主要区别是( ) A.温度不同 B.时间不同 C.前者适用于固体消毒，后者适用于液体消毒 D.没有区别 解析 煮沸消毒法是指在 100 条件下煮沸 56 min， 而巴氏消毒法则是在 70 75
3、 条件下煮 30 min 或在 80 条件下煮 15 min，二者的关键区别是温度不同。 答案 A 4.下列有关微生物培养无菌技术的叙述，正确的是( ) A.无菌技术的唯一目的是防止实验室的培养物被外来微生物污染 B.消毒和灭菌的原理是完全不同的 C.人体皮肤最好采用紫外线进行消毒 D.培养基往往采用高压蒸汽灭菌 解析 无菌技术可防止实验室的培养物被外来微生物污染，还可避免操作者自身 被病原微生物感染， A 错误； 消毒和灭菌均是通过理化手段， 使微生物的蛋白质、 核酸变性，从而失去生命活性，B 错误；紫外线可诱发皮肤细胞癌变，人体皮肤 不可采用紫外线进行消毒，C 错误；培养基往往采用高压蒸汽
4、灭菌，D 正确。 答案 D 强化点 3 大肠杆菌的纯化 5.有关纯化大肠杆菌实验操作的叙述，错误的是( ) A.在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 B.第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 C.每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种 D.划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感 染操作者 解析 在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于第一区域的划线末端， A 错误；为避免杂菌的污染，第一步操作时需要灼烧接种环，B 正确；每次划线 前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，C 正确；为
5、避 免细菌污染环境和感染操作者，划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的 菌种，D 正确。 答案 A 6.如图表示培养和纯化 X 细菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是( ) A.步骤倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置 B.步骤将接种环在火焰上灼烧后迅速沾取菌液后进行平板划线 C.步骤应多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落 D.步骤培养箱培养后可用来对 X 细菌进行计数 解析 分析图形可知，步骤倒平板操作时，倒好后适当冷却，然后将其倒过来 放置，A 错误；步骤将接种环在火焰上灼烧后冷却至室温沾取菌液后进行平板 划线，B 错误；步骤培养箱培养后可用来对 X 细菌进行分离纯
6、化，得到单个菌 落，D 错误。 答案 C 7.某同学在三种条件下培养大肠杆菌，这三种条件是： 以葡萄糖为碳源的培养基，不断补充培养基，及时去除代谢产物 以葡萄糖为碳源的培养基，不补充培养基，不去除代谢产物 以葡萄糖和乳糖为碳源的培养基，不补充培养基，不去除代谢产物 根据培养结果绘制的一段时间内菌体数的对数随时间变化的趋势图如下： 假设三种培养基中初始总糖量相等，则三种条件依次对应的趋势图是 ( ) A.甲、乙、丙 B.乙、丙、甲 C.丙、甲、乙 D.丙、乙、甲 解析 以葡萄糖为碳源的培养基，不断补充培养基，及时去除代谢产物，该条 件可以认为是一种理想条件，菌体的种群数量将呈“J”型曲线增长，对
7、应曲线丙； 以葡萄糖为碳源的培养基，不补充培养基，不去除代谢产物，会导致培养基中 营养物质越来越少，同时代谢废物的积累会导致菌体种群数量上升到一定程度后 可能会有减少的趋势，对应图象甲；在用葡萄糖和乳糖作碳源的培养基上培养 大肠杆菌，开始时，大肠杆菌只利用葡萄糖而不利用乳糖，只有当葡萄糖被消耗 完毕后，大肠杆菌才开始利用乳糖，所以在条件下，大肠杆菌的数量开始时会 增多，当葡萄糖被消耗完毕后，大肠杆菌由于没有碳源而使得数量暂不变化，当 其开始利用乳糖时，其数量又开始增多，当乳糖消耗完毕后，大肠杆菌的数量将 开始减少，对应图乙。 答案 C 综合提升 8.下列关于菌种保藏的叙述，错误的是( ) A.
8、对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法 B.需要长期保存的菌种，可以釆用甘油管藏的方法 C.临时保藏的菌种容易被污染或产生变异，因此保存时间不长 D.需要长期保存的菌种，可以与甘油混匀后放入 4 的冰箱中保藏 解析 需要长期保存的菌种，可以与甘油混匀后放入20 的冷冻箱内保存。 答案 D 9.下列关于微生物的实验室培养技术的表述，正确的是( ) A.溶化时将称好的牛肉膏从称量纸上直接倒入烧杯 B.常见的消毒方法包括灼烧、煮沸、紫外线和喷洒化学试剂等 C.配制固体培养基时加入琼脂，其目的是为微生物生长提供碳源 D.用移液管稀释菌液时，吹吸三次的目的是使菌液与水充分混匀 解析 称好的牛肉膏要连
9、同称量纸一起放入烧杯，待牛肉膏与称量纸分离后，用 玻璃棒取出称量纸；灼烧属于灭菌方法，不属于消毒方法；琼脂可以作为固体培 养基的凝固剂，而不能为微生物提供碳源；吹吸三次可以使菌液与水充分混合均 匀，使实验结果更加准确。 答案 D 10.某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。包括制备培养基、 灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。下列与此试验相关问题的叙述中，正确的 是( ) A.实验用过的带菌培养基经过加热后才能倒掉 B.利用平板划线法对细菌进行分离纯化并计数 C.观察细菌培养的实验时，最好是在另一平板上接种清水作为对照试验 D.培养基中含有的蛋白胨、淀粉可分別为细菌培养提供氮源和碳
10、源 解析 实验用过的带菌培养基要高压蒸汽灭菌后才能倒掉，以免污染环境，A 错 误；应利用稀释涂布平板法对细菌进行分离纯化并计数，B 错误；要使该实验所 得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种无菌水作为对照进行实验，C 错误； 培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源和碳源，D 正确。 答案 D 11.下表为牛肉膏、蛋白胨培养基的成分列表，据此回答： 成分 牛肉膏 蛋白胨 NaCl H2O 含量 0.5 g 1.0 g 0.5 g 100 mL (1)蛋白胨在培养基中的作用是_。 (2)要用此材料配制观察细菌菌落状况的培养基，还需添加的成分是_。 (3)表中各成分含量确定的原则是_。
11、(4)培养基配制好后，灭菌前应进行的工作是_。 (5)从配制培养基到培养完成，所采用的防止杂菌污染的具体操作事项有 _(答出两点即可)。 (6)如果是用试管培养微生物，在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是 _。 将其放入_冰箱里保藏，但这种方法的保存时间不长，菌种容易被污染 或产生变异。对于需要长期保存的菌种，需要放在_的冷冻箱中保存。 答案 (1)提供碳源和氮源 (2)琼脂(凝固剂) (3)所培养微生物对各营养成分的需要量 (4)调整 pH (5)高压蒸汽灭菌、烧灼接种环、酒精棉擦手、棉塞塞试管口、在火焰旁接种 (6)扩大接种面积 4 20 12.下图是生物兴趣小组为研究“金河牌酸奶中乳酸菌种
12、类及其耐药情况”而制 定的流程图。请分析回答： 配制细菌培 养基并灭菌 乳酸菌分 离纯化 乳酸菌耐 药性检测 (1)与酵母菌相比，乳酸菌在结构上的主要区别是_ 。 (2)本研究使用的细菌培养基中特别加入了一定量的碳酸钙，乳酸菌在 _(生理过程)中产生的乳酸能与不溶性的碳酸钙生成可溶性的乳酸 钙，从而在菌落周围形成溶钙圈。从物理形态分析，本研究使用的培养基属于 _类型。 (3)在利用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时，把锅内水加热煮沸，必须 _后，将锅密闭，继续加热以保证锅内气压上升，达到 121 。 灭菌后的培养基应适当冷却后，在_附近倒平板。 (4)请完善“检测乳酸菌对青霉素、四环素耐药性”实验操
13、作步骤： 步骤 1：分别取_加入三组无菌培养皿中，再 加入灭菌并冷却到 50 左右的培养基，立即混匀，静置凝固成平板。 步骤 2：向三组培养基中分别接种待检测的乳酸菌菌种。 步骤 3：将接种后的三组培养基和一个_都置于适宜温度等 条件下培养若干天，观察比较培养基中菌落生长情况。 解析 (1)酵母菌属于真核生物，乳酸菌属于原核生物，他们的区别在于乳酸菌细 胞内没有核膜包被的细胞核。(2)培养基中特别加入了一定量的碳酸钙，乳酸菌在 无氧呼吸中产生的乳酸能与不溶性的碳酸钙生成可溶性的乳酸钙，从而在菌落周 围形成溶钙圈。从物理形态分析，本研究使用的培养基属于固体培养基。(3)在利 用高压蒸汽灭菌锅对培
14、养基灭菌时，把锅内水加热煮沸，必须将锅内冷空气彻底 排除后，将锅密闭，继续加热以保证锅内气压上升，达到 121 。灭菌后的培养 基应适当冷却后，在酒精灯火焰附近倒平板。(4)步骤 1：分别取等量的青霉素、 四环素和无菌水加入三组无菌培养皿中， 再加入灭菌并冷却到 50 左右的培养基， 立即混匀，静置凝固成平板。步骤 3：将接种后的三组培养基和一个未接种的培 养基都置于适宜温度等条件下培养若干天，观察比较培养基中菌落生长情况。 答案 (1)细胞内没有核膜包被的细胞核(或“没有核膜”) (2)无氧呼吸 固体培 养基 (3)将锅内冷空气彻底排除 酒精灯火焰 (4)步骤 1：等量的青霉素、四环 素和无
15、菌水 步骤 3：未接种的培养基 13.某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。 实验包括制备培养 基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题： (1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉，分别为细菌培养提供了_和_。 (2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_。 (3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于 _中培养，培养的温度设定在 37 。要使该实验所得结果可靠，还应该 同时在另一平板上接种_作为对照进行实验。 (4)培养 20 小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中 有_种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的
16、程度越 _。 (5)B 图的接种方法是_。 答案 (1)氮源(碳源不作要求) 碳源 (2)高压蒸汽灭菌 (3)恒温培养箱 无菌 水 (4)多 高 (5)稀释涂布平板法 14.苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依 据图 1 操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下 列问题： 图 1 (1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为 碳源的有_。 (2)将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_， 以达到富集酚降解菌的目的。 若图 1 平板中菌落过于密集， 应进一步_， 以便于菌落计数与分离，制
17、备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添 加_。 (3)图 2 为连续划线法示意图， 在图中_(填图中序号)区域更易获得单菌落。 图 2 (4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系 列浓度梯度并进行显色反应，下表中 15 号比色管的苯酚浓度应分别为 _。 管号 1 2 3 4 5 6 苯酚浓度/ (mg L 1) 1 如果废水为 50 mg/L 苯酚溶液，降解后约有 21%的苯酚残留，则需将残留液稀释 _(填序号：5 10 20)倍后，再进行比色。 解析 (1)培养基成分中的有机物均可以提供碳源，即蛋白胨、苯酚，均可以作为 碳源。(2)分析实验可知，实验
18、目的是筛选酚降解菌，因此将采集到的样品接种培 养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐增加，以达到富集酚降解菌的目的。若图 1 平板中菌落过于密集，应进一步稀释涂布，以便于菌落计数与分离。平板培养 基属于固体培养基，该培养基需要加入琼脂作为凝固剂。(3)图 2 为平板划线法， 随着划线次数的增加，菌种进一步被稀释，因此图中区域更易获得单菌落。 (4)进行实验时，首先需要设置浓度为 0 的苯酚作为空白对照组，并且 6 号试管苯 酚浓度为 1，由此可见，浓度梯度应该为 0.2，即表中 15 号比色管的苯酚浓度 应分别为 0、0.2、0.4、0.6、0.8。如果废水为 50 mg/L 苯酚溶液，降解后约有 21% 的苯酚残留， 即残留液中苯酚浓度约为 10 mg/L， 与以上 6 支试管中的浓度相比， 需要将残留液稀释 20 倍后，再进行比色。 答案 (1)蛋白胨、苯酚 (2)增加 稀释涂布 凝固剂 (3) (4)0、0.2、0.4、0.6、0.8